二、缓冲液
免疫细胞化学中应用的缓冲液种类较多，即使是同种缓冲液，其浓度、pH、离子强度等也常常不同。在此介绍几种最常用的缓冲液的配制。
1．0.2mol/L(pH7.4)磷酸盐缓冲液（PhosphateBuffer, PB）
试剂： NaH2PO4·2H2O
Na2HPO4·12H2O
配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的 NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。
（1）0.2mol/L的 Na2HPO4；称取Na2HPO4.12H2o 31.2g(或 NaH2PO4·H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。
（2）0.2mol/L的 Na2HPO4：称取NaHPO4.·12H2o 71.632g（或 Na2HPO4·7H2O 53.6g或 Na2HPO4·2H2o 35.6g）加重蒸水至1000ml溶解。
（3）0.2mol/LpH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的 NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的 Na2HPO4·12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB（pH约为7.4～7.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。
2．0.01mol/L磷酸盐缓冲生理盐水（PhosphateBuffered Saline, PBS）
试剂：0.2mol/L PB 50ml
NaCl 8.5～9g(约0.15mol/L)
重蒸水 至1000ml
配制方法：称取NaCl 8.5～9g及0.2mol/L的PB 50ml，加入1000ml的容量瓶中，最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀即可。若拟配制0.02mol/L的PBS，则PB量加倍即可，依此类推。
PB和PBS是免疫细胞化学实验中最为常用的缓冲液，0.01mol/L的PBS主要用于漂洗组织标本、稀释血清等，其pH应在7.25～7.35之间，否则需要调整。0.1mol/L的PB常用于配制固定液、蔗糖等。一般情况下，0.2mol/l PB的pH值稍高些，稀释成0.01mol/L的PBS时，常可达到要求的pH值，若需调整pH，通常也是调PB的pH。
3．Karasson –Schwlt’s磷酸盐缓冲液
试剂： NaH2PO4·H2O3.31g
Na2HPO4·7H2O 33.77g
重蒸水 至1000ml
配制方法：同前
该缓冲液主要用于配制Zamboni’s固定液。
4．0.5mol/L pH7.6的Tris- HCl缓冲液。
试剂：Tris(三羟甲基氨基甲烷)60.57g
1N HCl 约420ml
重蒸水 至1000ml
配制方法：先以少量重蒸水（300～500ml）溶解Tris,加入HCl后，用1N的HCl或1N的NaOH将pH调至7.6，最后加重蒸水至1000ml。此液为储备液，于4℃冰箱中保存。免疫细胞化学中常用的Tris-HCl缓冲液浓度为0.05mol/L，用时取储备液稀释10倍即可。
该液主要用于配制Tris缓冲生理盐水（TBS）、DAB显色液。
5．Tris缓冲生理盐水（TrisBuffered,Saline,TBS）
试剂：0.5mol/L Tris-HCl缓冲液 100ml
NaCl 3.5～9g(0.15mol/L)
重蒸水至1000ml
配制：先以重蒸水少许溶解NaCl,再加Tris-HCl缓冲液，最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀使Tris终浓度为0.05mol/L。
TBS主要用于漂洗标本，常用于免疫酶技术中。
6．Tris-TBS(PBS)
试剂：Triton X-100 10ml(1%)或3ml(0.3%)
0.5mol/L Tris缓冲液（pH7.6）1000ml(50ml)或(0.2mol/L的PB)
NaCl8.5～9g
重蒸水 至1000ml
配制方法：先以重蒸水少许溶解NaCl后，加入Triton X-100及Tris缓冲液或（PB），最后加重蒸水至1000ml，充分摇匀。
该液常用浓度为1%及0.3%，前者主要用于漂洗标本，后者主要用于稀释血清。
7．0.1mol/L（pH7.4）二甲胂酸缓冲液
试剂：0.2mol/L二甲胂酸钠500ml
0.1N HCl28ml
蒸馏水 至1000ml
配制方法：先称取二甲胂酸钠（MW：214）42.8g,加蒸馏水至1000ml，使0.2mol/L的二甲胂酸钠溶液；再取HCl 1.7ml加蒸馏水至1000ml ,配成0.1N，最后 取0.2mol/L二甲胂酸钠溶液500ml及0.1n HCl 28ml混合，加蒸馏水至1000ml，即为0.1mol/L的二甲胂酸钠缓冲液。
8．几种常用的不同pH值缓冲液的配制表
（1）0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.0）
| pH | 0.2mol/L NaH2PO4(ml) | 0.2mol/L Na2HPO4(ml) |
| 5.7 | 93.5 | 6.5 |
| 5.8 | 92.0 | 8.0 |
| 5.9 | 90.0 | 10.0 |
| 6.0 | 87.7 | 12.3 |
| 6.1 | 85.0 | 15.0 |
| 6.2 | 81.5 | 18.5 |
| 6.3 | 77.5 | 22.5 |
| 6.4 | 73.5 | 26.5 |
| 6.5 | 68.5 | 31.5 |
| 6.6 | 62.5 | 37.5 |
| 6.7 | 56.5 | 43.5 |
| 6.8 | 51.0 | 49.0 |
| 6.9 | 45.0 | 55.0 |
| 7.0 | 39.0 | 61.0 |
| 7.1 | 33.0 | 67.0 |
| 7.2 | 28.0 | 72.0 |
| 7.3 | 23.0 | 67.0 |
| 7.4 | 19.0 | 81.0 |
| 7.5 | 16.0 | 84.0 |
| 7.6 | 13.0 | 87.0 |
| 7.7 | 10.5 | 89.5 |
| 7.8 | 8.5 | 91.5 |
| 7.9 | 7.0 | 93.0 |
| 8.0 | 5.3 | 94.7 |
(2)0.05mol/L Tris-HCl缓冲液（pH7.19～9.10）
| pH | 0.2mol/L Tris(ml) | 0.2mol/L HCl(ml) | H2O |
| 7.19 | 10.0 | 18.0 | 12.0 |
| 7.36 | 10.0 | 17.0 | 13.0 |
| 7.54 | 10.0 | 16.0 | 14.0 |
| 7.66 | 10.0 | 14.0 | 15.0 |
| 7.77 | 10.0 | 14.0 | 16.0 |
| 7.87 | 10.0 | 13.0 | 17.0 |
| 7.96 | 10.0 | 12.0 | 18.0 |
| 8.05 | 10.0 | 11.0 | 19.0 |
| 8.14 | 10.0 | 10.0 | 20.0 |
| 8.23 | 10.0 | 9.0 | 21.0 |
| 8.32 | 10.0 | 8.0 | 22.0 |
| 8.41 | 10.0 | 7.0 | 23.0 |
| 8.51 | 10.0 | 6.0 | 24.0 |
| 8.62 | 10.0 | 5.0 | 25.0 |
| 8.74 | 10.0 | 4.0 | 26.0 |
| 8.92 | 10.0 | 3.0 | 27.0 |
| 9.10 | 10.0 | 2.0 | 28.0 |
(3)0.2mol/L醋酸盐缓冲液（pH3.6～5.6）
| pH | 0.2mol/L醋酸（ml） | 0.2mol/L醋酸钠（ml） |
| 3.6 | 46.3 | 3.7 |
| 3.8 | 44.0 | 6.0 |
| 4.0 | 41.0 | 9.0 |
| 4.2 | 36.8 | 13.2 |
| 4.4 | 30.5 | 19.5 |
| 4.6 | 25.5 | 24.5 |
| 4.8 | 20.0 | 30.0 |
| 5.0 | 14.8 | 35.2 |
| 5.2 | 10.5 | 39.5 |
| 5.4 | 8.8 | 41.2 |
| 5.6 | 4.8 | 45.2 |
(4)0.1mol/L二甲胂酸钠缓冲液（pH5.0～7.4）
| pH | 0.2mol/L二甲胂酸钠（ml） | 0.2N HCl(ml) | 蒸馏水 |
| 5.0 | 25 | 23.5 | 51.5 |
| 5.2 | 25 | 22.5 | 52.5 |
| 5.4 | 25 | 21.5 | 53.5 |
| 5.6 | 25 | 19.6 | 55.5 |
| 5.8 | 25 | 17.4 | 57.5 |
| 6.0 | 25 | 14.8 | 60.3 |
| 6.2 | 25 | 11.9 | 63.1 |
| 6.4 | 25 | 9.2 | 65.8 |
| 6.6 | 25 | 6.7 | 68.3 |
| 6.8 | 25 | 4.7 | 70.3 |
| 7.0 | 25 | 3.2 | 71.8 |
| 7.2 | 25 | 2.1 | 72.9 |
| 7.4 | 25 | 1.4 | 73.6 |
注：HCI可由NCO3代替，配制成二甲胂酸钠-HNO3缓冲液。
（5）0.2mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.2～10.7）
| pH | 0.2mol/L Na2CO3(ml) | 0.2mol/L NaHCO3(ml) |
| 9.2 | 4.0 | 46.0 |
| 9.3 | 7.5 | 42.5 |
| 9.4 | 9.5 | 40.5 |
| 9.5 | 13.0 | 37.0 |
| 9.6 | 16.0 | 34.0 |
| 9.7 | 19.5 | 30.5 |
| 9.8 | 22.0 | 28.0 |
| 9.9 | 25.0 | 25.0 |
| 10.0 | 27.5 | 22.5 |
| 10.1 | 30.0 | 20.0 |
| 10.2 | 33.0 | 17.0 |
| 10.3 | 35.5 | 14.5 |
| 10.4 | 38.5 | 11.5 |
| 10.5 | 40.5 | 9.5 |
| 10.6 | 42.5 | 7.5 |
| 10.7 | 45.0 | 5.0 |
- 缓冲液《实用免疫细胞与核酸》
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- 缓脉《中医名词词典》
《实用免疫细胞与核酸》
- 前言
- 第一章 总论
- 第一节 有关的免疫学理论（缺）
- 第二节 免疫细胞化学的有关技术概述
- 第三节 有关细胞和组织学技术
- 参考文献
- 第二章 抗原和抗体的制备
- 第一节 抗原的制备（缺）
- 第二节 抗体的制备
- 第三节 抗体的提取与纯化（缺）
- 第三章 免疫荧光细胞化学技术
- 第一节 免疫荧光细胞化学的原理
- 第二节 荧光抗体的制备
- 一、荧光素
- （一）异硫氰酸荧光素（Fluoresceinisothiocyanate, GITC）
- （二）四乙基罗达明（tetraethylrodamineB200, RB200）
- （三）四甲基异硫氰酸罗达明（tetramethylrhodamineisothiocyanate, TMRITC）
- 二、荧光素标记抗体的方法
- 三、荧光抗体质量控制
- 四、荧光抗体的保存
- 第三节 免疫荧光细胞化学染色方法
- 第四节 荧光显微镜检查法
- 第五节 非特异性染色的消除方法
- 参考文献
- 第四章 免疫酶细胞化学
- 第一节 固定和切片
- 第二节 染色方法
- 第三节 结果分析
- 第四节 ICC的几种特殊应用
- 参考文献
- 第五章 免疫金银及铁标记技术
- 第一节 免疫金技术发展史
- 第二节 溶胶的基本概念
- 第三节 胶体金的制备方法
- 一、制备胶体金的准备
- 二、制备胶体金的方法和步骤
- 第四节 胶体金的质量鉴定
- 第五节 胶体金标记物的制备
- 第六节 免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择
- 第七节 光镜免疫金银细胞化学方法
- 第八节 免疫胶体铁细胞化学
- 参考文献
- 第六章 亲合组织化学技术及免疫细胞化学技术的某些进展
- 第一节 抗生物素—生物素免疫细胞化学染色法
- 一、基本原理
- 二、几中抗生物素—生物素染色法
- 第二节 葡萄球菌蛋白A（SPA）
- 第三节 凝集素
- 第四节 免疫细胞化学技术的某些新进展
- 参考文献
- 第七章 电子显微镜免疫细胞化学技术
- 第一节 电子显微镜免疫细胞化学技术概述
- 第二节 免疫铁蛋白技术
- 第三节 免疫酶细胞化学技术
- 第四节 免疫电镜胶体金标记法
- 第五节 其它免疫电镜技术
- 参考文献
- 第八章 蛋白质与多肽激素的放射免疫分析
- 第一节 概述
- 第二节 放射性碘标记
- 一、同位素的选择
- 二、蛋白质与多肽激素的放射性碘标记
- 三、放射性标记化合物的纯化与鉴定
- 第三节 结合和游离部分的分离
- 第四节 样品的前处理
- 第五节 放射免疫分析法的建立
- 参考文献
- 第九章 免疫细胞化学与图像分析
- 第十章 流式细胞术（FCM）在免疫细胞化学中的应用
- 第一节 流式细胞术简介
- 第二节 FCM在生物医学工程学方面的应用
- 第三节 FCM对外周白细胞的免疫荧光分析
- 参考文献
- 第十一章 免疫细胞化学在神经科学中的应用
- 一、确定神经递质的性质、定性和分布
- 二、探查和发现新的神经递质
- 三、追踪神经束的行径及其投射区
- 四、区别神经细胞、神经胶质细胞和神经内分泌细胞
- 五、研究神经递质的超威结构定位
- 六、神经递质共存的研究
- 七、个体和种族发育的研究
- 八、与神经组织培养技术相结合进行神经生物科学的研究
- 九、应用于受体的研究
- 十、神经系统的机能研究
- 第十二章 肿瘤免疫细胞化学
- 第一节 神经肿瘤免疫细胞化学
- 第二节 神经内分泌肿瘤免疫细胞化学
- 第三节 软组织与骨肿瘤细胞化学
- 第四节 免疫活性细胞及其肿瘤的免疫细胞学
- 一、免疫活性细胞的免疫细胞化学
- 二、恶性淋巴瘤的免疫细胞化学标记
- 第五节 上皮组织肿瘤免疫细胞化学
- 参考文献
- 第十三章 消化器官免疫细胞化学
- 第一节 胃肠道粘膜免疫细胞化学特点
- 第二节 胃肠道粘膜抗体产生细胞
- 第三节 消化道分泌生IgA
- 第四节 胃肠道粘膜T淋巴细胞
- 第五节 癌胚抗原的免疫细胞化学
- 第六节 胃肠道溶菌酶
- 第七节 消化管壁内神经丛的免疫细胞化学
- 第八节 肝脏疾病免疫细胞化学
- 参考文献
- 第十四章 肾脏疾病免疫细胞化学
- 第一节 免疫细胞化学技术在肾脏疾病中的应用范围
- 第二节 荧光或酶标抗体在肾脏内显示的部位及形式
- 第三节 免疫细胞化学技术在肾脏疾病中应用的意义
- 第四节 各种肾脏疾病的病变以及免疫荧光（酶标）表现特征
- 一、原发性肾小球疾病
- 二、继发于全身性疾患的肾小球疾病
- 三、结缔组织病时的肾脏损害
- 四、血管性疾患导致肾脏的损害
- 五、代谢性疾患引起的肾脏损害
- 六、某些特殊疾病时的肾脏损害
- 七、遗传性和先天性肾病
- 八、杂病
- 九、肾移植
- 十、肾小管间质性疾病
- 参考文献
- 第十五章 自身抗体的免疫组织化学检测方法和应用
- 第一节 自身抗体的免疫组织化学检测方法
- 第二节 在研究和诊断自身免疫性疾病中的应用
- 一、抗核抗体（Antinuclearantibodies, ANA）的检测
- 二、双链DNA抗体（Double strand DNA antibody, dsDNA）的检测方法和应用
- 三、抗核仁抗体的检测法
- 四、抗组蛋白抗体的检测方法
- 五、抗着丝点抗体的检测方法
- 六、抗甲状腺自身抗体（ThyroidAutoantiodies）的检测方法
- 七、平滑肌抗体（Smooth muscle antibody , SMA）的检测
- 八、肝细胞膜抗体（Antibodyto the hepatocyte membrane, HMA）的检测
- 九、线粒体抗体（Mitochondrial antibody, AMA）
- 十、胃壁细胞抗体（Gastricparietal cell antibodies, PCA）的检测
- 十一、胃泌素细胞抗体（GastrinCell antibodies, GCA）的检测
- 十二、胰岛细胞抗体（Isletcell antibady, ICAb）的检测
- 十三、抗肾小球和肺泡基底膜抗体的检测
- 十四、抗皮肤成分自身抗体的检测
- 十五、唾液腺外分泌导管上皮自身抗体的检测
- 十六、抗横纹肌自身抗体的检测
- 十七、肾上腺自身抗体的检测
- 十八、类风湿因子（Rheumatoidfactor）的检测
- 十九、抗中性白细胞胞浆自身抗体（Anti－eutrophilcytoplasmic autoantibody ANCA）
- 二十、增殖细胞核抗原抗体（Proliferativecell nuclear antigen antibody, PCNA）
- 二十一、抗类风湿关节 炎相关核抗原的抗体（Antirheu－matoidarthritis associated nuclear antigen antibody, RANA）
- 二十二、抗精子抗体（Anti-spermantibody, ASA）
- 二十三、其他自身抗体的检测
- 第三节 自身抗体产生的机理
- 参考文献
- 第十六章 病原体的免疫细胞化学快速检查方法和应用
- 第一节 在细菌学中的应用
- 一、甲组溶血性链球菌的快速检查法
- 二、脑膜炎双球菌的快速检查法
- 三、霍乱弧菌和副霍乱弧菌的快速检查法
- 四、鼠疫杆菌的快速检查法
- 五、炭疽杆菌的快速检查法
- 六、致病性大肠杆菌的快速检查法
- 七、结核杆菌的快速诊断方法
- 八、其他细菌的快速检查方法
- 九、钩端螺旋体的检查法
- 十、梅毒螺旋体的检查法
- 第二节 在病毒学中的应用
- 第三节 在寄生虫学中的应用
- 第四节 在真菌学中的应用
- 参考文献
- 第十七章 免疫细胞化学在皮肤病学的应用
- 第一节 角朊细胞
- 第二节 黑素细胞及其肿瘤
- 第三节 Merkel细胞
- 第四节 郎格罕细胞
- 第五节 真皮与表皮交界
- 第六节 免疫细胞化学技术在真皮纤维化性疾病研究中的应用
- 第七节 真皮浸润细胞免疫表达
- 第八节 汗腺及汗腺肿瘤的免疫细胞化学特点
- 参考文献
- 第十八章 核酸分子杂交技术概述
- 第一节 核酸的分子结构
- 第二节 DNA的变性与复性
- 第三节 分子杂交
- 第四节 石蜡包埋组织的DNA提取及其应用
- 参考文献
- 第十九章 核酸（基因）分子探针
- 第一节 概述
- 第二节 核酸（基因）探针目的核酸的制备技术
- 第三节 放射性同位素标记核酸探针
- 第四节 非放射性标记的核酸探针
- 一、生物素标记核酸探针方法
- 二、光敏生物素标记核酸探针
- 三、生物素-补骨脂素（Biotin -psoralen）标记法
- 四、生物素-α-氨基乙酸-N-羟基琥珀标记化学修饰的DNA法
- 五、缺口平移法标记生物素DNA探针（二步法）
- 六、生物素随机引物标记探针方法
- 七、异羟基洋地黄毒甙（Digoxigenin）标记核酸探针
- 八、光敏2，4-二硝基苯（光敏DNP）标记DNA法
- 九、三硝基苯磺酸（TNBS）标记核酸探针
- 十、生物素化的RNA探针标记
- 十一、辣根过氧化物酶标记核酸探针法
- 十二、用聚合酶链反应标记高活性DNA探针
- 第五节 寡核苷酸探针的制备
- 参考文献
- 第二十章 原位杂交组织化学
- 第一节 原位杂交组织化学概述
- 第二节 cRNA探针在原位杂交组织化学（ISHH）中的应用
- 第三节 DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的应用
- 第四节 原位杂交组织化学与免疫细胞化学结合法
- 第五节 原位杂交免疫细胞化学技术的未来与展望
- 参考文献
- 第二十一章 原位杂交技术在染色体和电镜水平的应用
- 第一节 原位杂交技术在染色体铺片的应用
- 一、有关染色体的基本知识及制片
- 二、应用ISHH技术对染色体制片、基因分配（Chromosomalassignment of genes）的研究
- 三、利用ISHH技术对肿瘤或癌前组织的细胞间期染色体铺片进行研究
- 四、利用性染色体特异性DNA探针的ISHH技术
- 第二节 原位分子杂交技术在电镜水平的应用
- 一、应用同位素标记cRNA探针电镜原位杂交技术于染色体制片（Hutchison et al,1982）
- 二、应用生物素标记DNA探针电镜原位杂交技术
- 三、应用地高辛标记rRNA探针的电镜原位杂交技术
- 四、结语
- 参考文献
- 第二十二章 聚合酶链反应（PCR）技术的发展和应用
- 第一节 概述
- 第二节 PCR技术的原理
- 第三节 PCR操作范例及反应体系的组成
- 第五节 PCR各处应用模式
- 一、兼并引物（DegeneratePrimer）PCR
- 二、套式引物（NestedPrimer）PCR
- 三、复合PCR（Multiplex PCR）
- 四、反向PCR（Inverse PCR或Reverse PCR）
- 五、不对称PCR（Asymmetric PCR）
- 六、标记PCR（LP-PCR）和彩色PCR
- 七、加端PCR
- 八、锚定PCR或固定PCR
- 九、玻片PCR
- 十、反转录PCR方法检测RNA
- 十一、定量PCR
- 第六节 样品处理与注意事项
- 第七节 PCR仪器的发展
- 第八节 PCR临床应用领域及特点
- 第九节 其它链扩增技术及应用范围
- 一、免疫PCR
- 二、转录依赖的扩增系统（Transcription-basedAmplification System , TAS）
- 三、再生式序列复制技术（3SR）
- 四、连接酶链式反应（Ligase ChainReaction,LCR）
- 五、PCR-SSCP分析技术
- 六、结语
- 参考文献
- 第二十三章 DNA重组技术及其在基因诊断中的应用
- 第一节 工具酶
- 一、DNA限制性内切酶
- 二、甲基化酶
- 三、分子克隆化的另一些酶
- 第二节 分子克隆载体
- 第三节 DNA重组实验中常用的技术
- 第四节 遗传病与肿瘤的基因诊断
- 第五节 “DNA指纹”与法医鉴定
- 参考文献
- 附录
- 附录一 免疫细胞化学常用试剂介绍
- 附录二 原位杂交组织化学常用试剂及处理
- 附录三 全血细胞培养染色体技术常用试剂配制
- 附录四 实验室常用技术参数资料
- 本书常用缩写词
