【岐黄之术】

(二)核酸探针的非放射性标记技术

《实用免疫细胞与核酸》书籍目录

1.光敏生物素标记核酸 目前使用的光标生物素试剂有两种:光生物素(乙酸盐)和补骨脂素生物素。它们都是由一个光敏基团、一个连接臂和一个生物素基团组成。光生物素的光敏基团是-N3,它在光作用下可与核酸中的碱基结合。补骨脂素生物素中的光敏基团补骨脂素在光照(320~400μm)下,可与单链或双链核酸发生反应,反应主要在T上,C上也有一定程度的反应。光敏生物素的连接臂含6~12个碳原子,用以减少探针杂交时的空间位阻。光敏生物素标记核酸,方法简单,灵敏度也可达到pg水平,可用于外源基因的检测。最近出现了一种新的光敏活性DNA生物素试剂,即生物素-聚乙二醇-当归素(BPA)。BPA的DNA结合部分是一个活性糖香豆素衍生物,在长波UV下它可与DNA碱基共价键结合。BPA反应物与DNA结合比光敏生物素更特异,在可见光下它不与核酸反应,这个特性可使BPA只标记粗制细胞裂解物中的核酸,而不标记蛋白、多糖和其他细胞大分子。

2.酶促生物素标记核酸 以生物素化的脱氧核苷三磷酸(Bio-11-dUTP,Bio –7 – dATP、Bio-11-dCTP)等代替相应32P标记的脱氧核苷三磷酸,经DNA聚合酶作用掺入DNA。Bio-dUTP代替dTTP,Bio-dATP代替dATP,Bio- dCTP代替dCTP。Bio –11-dUTP的11是指生物素基团与脱氧核苷酸之间连接臂的碳链长度。常用的酶促生物素标记DNA的方法有缺口平移法和随机引物延伸法。

3.寡核苷酸的生物素末端标记 有5’-磷酸的化学标记法和3’-OH的酶促标记法。前者将寡核苷酸的5’-磷酸接上一个乙二胺,然后用琥珀酰亚胺生物素,将生物素基团连接在磷酸酰胺基上。后者是用末端转移将Bio-11–dUTP加于其3’-OH端(脱去一个焦磷酸)。

4.酶标DNA 标记试剂是辣根过氧化酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)。通过对苯醌(PBQ)与聚乙烯亚胺(PEI)连接而成(HRP-PBQ-PEI+),此试剂在戊二醛的作用下与变性的DNA结合,使HRP与DNA连接在一起,组成HRP标记的DNA探针。

5.酶标寡核苷酸 包括核苷酸5’末端标记HRP法和内部标记AP法。前者是在HRP中产生一个-HS反应基团,在寡核苷酸合成终了加在5’端,带一个C6的-HS基,与活化的HRP反应生成5’-HRP寡核苷酸。后者是在全成寡核苷酸过程中将一个5’带连接臂及CF3基团的尿苷3’亚磷酰亚胺合成在寡核苷酸链中,合成后此活化的寡核苷酸与AP反应即得到AP标记的寡核苷酸。

6.DNA半抗原标记 其原理与Bio-11-dTUP相同,只是用毛地黄甙代替生物素形成Dig –11- dUTP,酶促掺入DNA分子。用抗毛地黄甙抗体检测标记在DNA上的半抗原分子Digoxigenin(地高辛)

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  1. 核酸探针的非放射性标记技术《实用免疫细胞与核酸》
  2. 核酸探针的常用酶促标记技术《实用免疫细胞与核酸》
  3. 核酸探针的种类《实用免疫细胞与核酸》
  4. 核酸探针的标记和检测(详见每十九章 )《实用免疫细胞与核酸》
  5. 核酸探针的种类《基因诊断与性传播疾病》
  6. 核酸探针的标记和检测《基因诊断与性传播疾病》
  7. 核酸外切酶《实用免疫细胞与核酸》
  8. 核酸酶S1《实用免疫细胞与核酸》
  9. 核酸限制性片段长度多态性(RFLP)分析《临床生物化学》
  10. 核酸扩增技术《临床生物化学》
  11. 核酸一级结构(核苷酸序列sequence)分析《临床生物化学》
  12. 核酸及蛋白质常用数据《实用免疫细胞与核酸》
  13. 核酸杂交法《生物化学与分子生物学》
  14. 核酸分子杂交实验因素的优化《实用免疫细胞与核酸》
  15. 核酸杂交技术《临床生物化学》
  16. 核酸分子杂交技术《实用免疫细胞与核酸》
  17. 核糖含量测定《中国生物制品规程》
  18. 核酸分子杂交方法《基因诊断与性传播疾病》
  19. 核糖核蛋白体《生物化学与分子生物学》
  20. 核酸分子杂交法《基因诊断与性传播疾病》
  21. 核桃《老年食养食疗》
  22. 核酸分子杂交的类型《实用免疫细胞与核酸》
  23. 核桃风《解围元薮》
  24. 核酸的一级结构《实用免疫细胞与核酸》
  25. 核桃膏《食物疗法》
  26. 核酸的理化性质《基因诊断与性传播疾病》
  27. 核桃枸杞粥《保健药膳》
  28. 核酸的结构与功能《生物化学与分子生物学》
  29. 核桃灸《中医词典》
  30. 核酸的化学组成《实用免疫细胞与核酸》
  31. 核桃仁炒韭菜(《方脉正宗》)《中医饮食营养学》

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