(三)RNA探针

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RNA探针是一类很有前途的核酸探针,由于RNA是单链分子,所以它与靶序列的杂交反应效率极高。早期采用的RNA探针是细胞mRNA探针和病毒RNA探针,这些RNA是在细胞基因转录或病毒复制过程中得到标记的,标记效率往往不高,且受到多种因素的制约。这类RNA探针主要用于研究目的,而不是用于检测。例如,在筛选逆转录病毒人类免疫缺陷病毒(HIV)的基因组DNA克隆时,因无DNA探针可利用,就利用HIV的全套标记mRNA作为探针,成功地筛选到多株HIV基因组DNA克隆。又如进行中的转录分析(nuclear run on transcrip-tion assay)时,在体外将细胞核分离出来,然后在α-32P-ATP的存在下进行转录,所合成mR-NA均掺入同位素而得到标记,此混合mRNA与固定于硝酸纤维素滤膜上的某一特定的基因的DNA进行杂交,便可反映出该基因的转录状态,这是一种反向探针实验技术。

近几年体外转录技术不断完善,已相继建立了单向和双向体外转录系统。该系统主要基于一类新型载体pSP和pGEM,这类载体在多克隆位点两侧分别带有SP6启动子和T7启动子,在SP6RNA聚合酶或T7RNA聚合酶作用下可以进行RNA转录,如果在多克隆位点接头中插入了外源DNA片段,则可以此DNA两条链中的一条为模板转录生成RNA。这种体外转录反应效率很高,在1h内可合成近10μg的RNA产生,只要在底物中加入适量的放射性或生物素标记的NTP,则所合成的RNA可得到高效标记。该方法能有效地控制探针的长度并可提高标记物的利用率。

值得一提的是,通过改变外源基因的插入方向或选用不同的RNA聚合酶,可以控制RNA的转录方向,即以哪条DNA链以模板转录RNA。这种可以得到同义RNA探针(与mRNA同序列)和反义RNA探针(与mRNA互补),反义RNA又称cRNA,除可用于反义核酸研究外,还可用于检测mRNA的表达水平。在这种情况下,因为探针和靶序列均为单链,所以杂交的效率要比DNA-DNA杂交高几个数量级。RNA探针除可用于检测DNA和mRNA外,还有一个重要用途,在研究基因表达时,常常需要观察该基因的转录状况。在原核表达系统中外源基因不仅进行正向转录,有时还存在反向转录(即生成反义RNA),这种现象往往是外源基因表达不高的重要原因。另外,在真核系统,某些基因也存在反向转录,产生反义RNA,参与自身表达的调控。在这些情况下,要准确测定正向和反向转录水平就不能用双链DNA探针,而只能用RNA探针或单链DNA探针。

综上所述,RNA探针和cRNA探针具有DNA探针所不能比拟的高杂交效率,但RNA探针也存在易于降解和标记方法复杂等缺点。

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  1. RNA探针《实用免疫细胞与核酸》
  2. RNA酶《实用免疫细胞与核酸》
  3. RNA转录后的加工与修饰《生物化学与分子生物学》
  4. RNA聚合酶《实用免疫细胞与核酸》
  5. Roth氏综合征《神经精神疾病诊断学》
  6. RNA分子结构《基因诊断与性传播疾病》
  7. rRNA转录后加工《生物化学与分子生物学》
  8. RNA的转录过程《生物化学与分子生物学》
  9. RS癌症基因《基因与疾病》
  10. RNA的生物合成《生物化学与分子生物学》
  11. Rubinstein-Taybi氏综合征《神经精神疾病诊断学》
  12. RNA的结构与功能《生物化学与分子生物学》
  13. 《四圣心源》
  14. RNA的复制《生物化学与分子生物学》
  15. 《四圣悬枢》
  16. RNA《实用免疫细胞与核酸》
  17. S《生理学》
  18. Riley-Day氏综合征《神经精神疾病诊断学》
  19. S《医学统计学》
  20. Rh血型系统《生理学》
  21. S《医学遗传学基础》
  22. Rh血型系统《临床基础检验学》
  23. S《传染病》
  24. Rh血型不合《默克家庭诊疗手册》
  25. S IgA合成及其功能《实用免疫细胞与核酸》
  26. Reiter综合征《家庭医学百科-医疗康复篇》
  27. S Sh《伤寒悬解》
  28. RANTES《细胞和分子免疫学》
  29. S Sh《金匮悬解》
  30. R《传染病》
  31. S Sh《伤寒说意》