四、蛋白质的胶体金标记
当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后便可进行标记。具体步骤如下:
(1)根据用以标记的胶体金的总量计算出所需要的待标记蛋白质的总量。
(2)在电磁搅拌下,将蛋白质溶液加入胶体金溶液中(pH已调至PI超过0.5pH),加入蛋白质时应逐滴加入,1mg的蛋白质大约5min加完。
(3)在磁性搅拌下加入5%的牛血清白蛋白(BSA)使其终浓度为1%,或加入3%聚乙二醇(PEg MW20000)使其终浓度为0.05%, 我们对比了BSA和PEG稳定胶体金的效果,BSA稳定的标记胶体金,放在4℃达2年半仍然保持良好性能,而用PEG稳定的标记胶体金放在4℃1年左右就有分层现象,而且染色效果显著下降。因此,我们认为最好还是用BSA作稳定剂。
(4)将标记好的胶体金装入透析袋中,两头扎紧,放入蔗糖或硅胶中浓缩,浓缩到原体积的1/10量,浓缩完毕后纯化。离心法纯化时,不要浓缩。
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