【岐黄之术】

第二节 PCR技术的原理

《实用免疫细胞与核酸》书籍目录

PCR是体外酶促合成特异DNA片段的新方法,主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成:即在高温(95℃)下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在Taq酶的最适温度(72℃)下,以引物3’端为合成的起点,以单核苷酸为原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成DNA新链。这样,每一双链的DNA模板,经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行,每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板,每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍,PCR产物得以2n的批数形式迅速扩增,经过25~30个循环后,理论上可使基因扩增109倍以上,实际上一般可达106~107倍。

 PCR基本原理示意图

图22-1 PCR基本原理示意图

假设扩增效率为“X”,循环数为“n”,则二者与扩增倍数“y”的关系式可表示为:y=(1+X)n。扩增30个循环即n=30时,若X=100%,则y=230=1073741824(>109);而若X=80%时,则y=1.830=45517159.6(>107)。由此可见,其扩增的倍数是巨大的,将扩增产物进行电泳,经溴化乙锭染色,在紫外灶照射下(254nm)一般都可见到DNA的特异扩增区带。

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  1. PCR技术的原理《实用免疫细胞与核酸》
  2. PCR缓冲液《实用免疫细胞与核酸》
  3. PCR介导的信号转导途径《细胞和分子免疫学》
  4. PCR方法《基因诊断与性传播疾病》
  5. PCR扩增产物的分析法《基因诊断与性传播疾病》
  6. PCR反应的基本条件及其对PCR的影响《基因诊断与性传播疾病》
  7. PCR实验中常见问题对策《基因诊断与性传播疾病》
  8. PCR法《生物化学与分子生物学》
  9. PCR仪器的发展《实用免疫细胞与核酸》
  10. PCR的特点《基因诊断与性传播疾病》
  11. PCR应用领域《实用免疫细胞与核酸》
  12. PCR的基本原理和基本程序《基因诊断与性传播疾病》
  13. PCR应用特点《实用免疫细胞与核酸》
  14. PCR操作范例《实用免疫细胞与核酸》
  15. PCR与原位杂交细胞化学结合法《实用免疫细胞与核酸》
  16. PCR标本的制备《基因诊断与性传播疾病》
  17. PE、社会药学与医院药学的关系《医院药学》
  18. PCR-SSCP分析技术《实用免疫细胞与核酸》
  19. PEEP和CPAP的应用《急诊医学》
  20. PCO2、H+和PO2在影响呼吸中的相互作用《生理学》
  21. PE-标记蛋白A方法《实用免疫细胞与核酸》
  22. Parry-Romberg氏综合征《神经精神疾病诊断学》
  23. PG《生物化学与分子生物学》
  24. Parinaud氏综合征《神经精神疾病诊断学》
  25. PG、TX及LT的生理功能《生物化学与分子生物学》
  26. PAP免疫电镜双重标记《实用免疫细胞与核酸》
  27. pH对反应速度的影响《生物化学与分子生物学》
  28. PAP法《实用免疫细胞与核酸》
  29. pH梯度法《胃肠动力检查手册》
  30. PAP包埋前染色法(Pickel 等,1975)《实用免疫细胞与核酸》
  31. PH值测定(电位法)《中国生物制品规程》

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