(二)乳过氧化物酶法

《实用免疫细胞与核酸》书籍目录

本法反应温和,对抗原、抗体免疫活性影响小,已被广泛应用。缺点是标记率较低,一般为20~40%。

1.原理此法是利用乳过氧化物酶(Lactoperoxidase)有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用,生成125I+,并标记在多肽、蛋白质酪氨酸分子上。

2.方法以标记蛋白质抗原为例。

(1)反应液组成:蛋白质2~5μg溶于磷酸缓冲液10~25μl中,加入Na125i 1m Ci(10μl)、乳过氧化物酶溶液25ng(10μl)、H2O2200ng(10μl);

(2)在室温保温7min;

(3)加入H2O2200ng(10μl);

(4)过7min再加入H2O2(3μl);

(5)保温7min后,加入0.5ml、10mmol/L巯基乙醇以停止反应;

(6)10min后加入NaI载体溶液1ml ;

(7)按常规方法分离纯化。

3.注意事项

(1)LPO质量好坏,可直接影响标记率,LPO应在使用前新鲜配制,以防酶活性降低。

(2)LPO用量应小于总蛋白质用量的1%,以减少酶自身碘化而带入的放化杂质。

(3)碘化反应速率分析表明,酶的催化速度很快。

(4)碘化反应在pH4.0~8.5较宽范围内均可进行,最适pH值应依据蛋白质本身性质而定。

(5)H2O2应保持低浓度,如高于0.1mmol/L,对酶的活性将有抑制作用。

1000余本中医古籍txt电子书免费下载

下载《实用免疫细胞与核酸》 电子书打不开?

下载所有中医书籍


返回《实用免疫细胞与核酸》书籍目录
  1. 乳过氧化物酶法《实用免疫细胞与核酸》
  2. 乳管内乳头状瘤《普通外科学》
  3. 乳核《中医名词词典》
  4. 乳根痈《万氏秘传外科心法》
  5. 乳核《中医外科学》
  6. 乳根痈《中医词典》
  7. 乳花《外科十三方考》
  8. 乳根《针灸学》
  9. 乳积《中医词典》
  10. 乳根《中医词典》
  11. 乳积《证治准绳·幼科》
  12. 乳根《针灸大成》
  13. 乳积《儿科萃精》
  14. 乳杆菌属《医学微生物学》
  15. 乳疾《医述》
  16. 乳疳门主论《疡医大全》
  17. 乳疖秘方《华佗神方》
  18. 乳疳《中医词典》
  19. 乳结《奇效简便良方》
  20. 乳柑子《证类本草》
  21. 乳结核《中医词典》
  22. 乳柑子《本草衍义》
  23. 乳结核候《巢氏病源补养宣导法》
  24. 乳腐《证类本草》
  25. 乳结核候《诸病源候论》
  26. 乳腐《食疗本草》
  27. 乳金丹《何氏虚劳心传》
  28. 乳房肿胀用麦芽《女科经纶》
  29. 乳疽《中医名词词典》
  30. 乳房肿物《常见病自测》
  31. 乳疽《中医词典》

《实用免疫细胞与核酸》