一、缺口平移法
在适当的浓度的DNase I作用下在一双链DNA上制造一些缺口,再利用大肠杆菌DNA聚合酶I 的5’—3’外切酶活性依次切除缺口下游的核酸序列,同时将四种脱氧三磷酸核苷(其中一种用放射性标记)利用该酶5’—3’聚合活性补人缺口,使缺口逐个平称并在平移过程中形成标记的新生核酸链。此法也适用于探针的非放射性标记。如32P标记DNA探针(缺口平移法):反应体积为25μl,内含0.3μgDNA片段,4μl 0.2μmol/L dNTP, 1.1×106Bq [α-32P]dATP,1μl2万倍稀释的DNA酶和2μl DNA聚合酶I,6μl缓冲液[为50mmol/l Tris·HCl(PH7.2)、10mmol/l MgSO4、1mmol/L二硫苏糖醇(DTT)和50μg/ml BSA],反应在14℃进行3h。标记DNA经Sephadex (G-50)柱层析回收。
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