一、应用同位素标记cRNA探针电镜原位杂交技术于染色体制片

（1）将整封染色体铺片放置于金网上，在70%的酒精蒸汽固定4～15h，空气干燥。

（2）以强碱使DNA变性，将金网置于2×SSC内（应用0.1n NaOH调整至pH12），室温，2min。

（3）脱水，以70%和95%酒精各冲洗3次，空气干燥。

（4）杂交，金网覆于平面玻璃皿（ Petri dish）内的杂交液滴上，每滴约10～15μl，将此小碟置于盛于杂交缓冲的大塑料盒内，保持湿润，在60～65℃孵育4～24h。

杂交液的配制：6×SSC或6×TNS（1×TNs =0.1mol/L NaCl,0.01mol/L Tris,Ph6.8,含30000～50000cpm/10μl³h cRNA）。

（5）杂交后冲洗，金网自杂交液中取出后立即用大量的2×SSC冲洗多次。RNA酶溶液（20μg/ml）室温冲洗，然后再用2×SSC室温冲洗，冲洗后梯度酒精脱水（70%，95%）空气干燥。

（6）浸入乳胶膜，应用L-4核乳胶液，水稀释4倍。浸膜后的金网，用胶带固定在载玻片上放在密封的黑色塑料盒内，4℃，时间根据同位素种类和靶mRNA含量而定，也可选择不同时间曝光，根据显影强弱确定最终显影的时间。

（7）显影。暗盒自冷房或冰箱中取出后，在室渐中回暖至少30min，以防核乳胶膜皱缩。然后在显影液（Kodax Microdol X）显影3～5min，温度18～24℃。水冲，在15% Kodax快速定影液定影5min，然后在空气中干燥。

所有溶液应尽可能新鲜配制。

（8）电镜观察。