七、异羟基洋地黄毒甙(Digoxigenin)标记核酸探针

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1988年德国Boehringer Manheims公司推出了一种地高辛标记DNA检测试剂盒。先将地高辛甙元通过一手臂联接至dUTP上,用随机引物法标记DNA制成探针。平均每20~25个核苷酸中标记一个地高辛甙元,然后用抗地高辛抗体的Fab片段与碱性磷酸酶的复合物和NBt – BCIP底物显色检测,灵敏度达0.1pg DNA,因此可做1μg哺乳动物DNA中单拷贝基因分析。此种探针有高度的灵敏性和特异性,安全稳定,操作简便,可避免内源性干扰,是一种很有推广价值的非放射性标记探针。

标记方法步骤:(1)取一小离心管(0.5ml)插入冰浴中,加入待标记DNa 1μg/5μl,95℃变性10min,迅速移入盐冰中3min。加入六核苷酸引物2μl,Dig-dNTP标记物2μl和消毒双蒸水10μl、大肠杆菌DNA聚合酶i Klenow片段1μl(单位)。(2)短时离心,37℃孵育至少60min(20h以内)。(3)加入2μl 0.2mol/L EDTA溶液中止反应。再加入2.5μl 4mol/L LiCl和75μl预冷的乙醇(-20℃),放入-70至少30min或-20过夜。(4)离心(12000g)10min,弃上清,再加入70%乙醇(冷)40μl洗一次,离心,抽干,再溶于50μl TE溶液(pH8.0)中,分装,-20℃存放备用。

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  1. 异羟基洋地黄毒甙(Digoxigenin)标记核酸探针《实用免疫细胞与核酸》
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  6. 异类有情丸《冯氏锦囊秘录》
  7. 异位辅助性肝移植《临床肝移植》
  8. 异类有情丸《韩氏医通》
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  12. 异疽似痈《奇方类编》
  13. 异位妊娠《中医妇科学》
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  21. 异位损害及并发症《传染病》
  22. 异功散《小儿药证直诀》
  23. 异位性皮炎《皮肤性病学》
  24. 异功散《瘴疟指南》
  25. 异位性皮炎《默克家庭诊疗手册》
  26. 异功散《脾胃论》
  27. 异戊巴比妥《精神药品临床应用指导原则》
  28. 异功散《目经大成》
  29. 异物定位《放射诊断学》
  30. 异功散《冯氏锦囊秘录》
  31. 异物眯目《中医眼科学》