二、快速原位杂交细胞化学技术

原位杂交免疫细胞化学技术存在的难点之一是实验手续繁琐，实验周期长。国外Liesi等（1986）和国内学者何彬等应用光敏生物素-链亲合素（Biotin-streptavidin）胶体金系统进行原位杂交，得到了快速满意的结果，全部实验可在数小时内完成。

作用把含某种多肽或蛋白的cDNA片段的质粒，按照第十九章　在光照下标记光敏生物素，然后经DNA酶消化1h，得到大量100～500bp长度的混合片段，变性后用于原位杂交。

如为培养细胞或细胞涂片，用95%乙醇、5%乙醇固定5min，PBS冲去固定液，加含探针的杂交液覆盖（光敏生物素标记探针浓度为2.5ng/μl），在温盒中50℃孵育1～2h，取出后直接加入胶体金标记链亲合素（1mg/ml）室温孵育15min，然后在室温或37℃下用大容量（200ml/每片）洗脱液（2×SSC，0.1%Triton X-100）分别冲洗5～10min，以银显影液放大金颗粒显示原位杂交结果，可用1%伊红复染，脱水，透明，封片，镜检。

如为冰冻切片（cryostat section 10～15μm），应经新鲜配制4%多聚甲醛室温固定15min，PBS冲去固定液，吸干后滴加蛋白酶K（25μg/ml,Sigma）37℃15min，再用4%多聚甲醛室温固定20min，PBS冲去多聚甲醛，晾干后按上述方法进行原位杂交和杂交后冲洗。