三、应用特异单引物法标记DNA探针
应用探针DNA上的一个片段作为DNA引物,以环化探针DNA的重组质粒DNA为模板,在DNA聚合酶的作用下,通过变性,退火和延伸过程,使探针DNA得到标记。反应在0.5ml离心管内进行,总体积为25μl,内含50mmol/l Tris—HCl pH7.5, 10mmol/L MgCl2、BSa 5mmol/L、80ng引物DNA和0.1μg连接的DNA或0.1μg质粒。反应管在95℃变性5min,取出,稍离心,立即放入37℃C水浴保温2min使DNA退火,加入1UE.coli DNA聚合酶I,在37℃进行延伸反应。对环化基因,延伸18min,对质粒DNA延伸35min重复上述变性、退火和延伸过程1次。
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