3．标记生物素—抗生物素技术（Labelled Avidin—Biotin technique, LAB技术）

以生物素标记抗体作第一抗体，酶标记抗生物素作为第二抗体（图6-3）。操作步骤如下：

图6-3　LAB技术

（1）切片在含有25～50μg/ml生物素标记抗体（PBS液稀释）中孵育1h，室温。

（2）PBS洗2次，每次5min。

（3）用20～50μg/ml过氧化物酶标记的抗生物素液孵育90min，水洗。

（4）酶呈色反应。

BRAB法和LAB示是Guesdon及其同事们（1979）建立的，由于这二种方法都需以生物素标记第一抗体，应用不如ABC法普遍。但用于免疫细胞中免疫球蛋白的显示具有特异性。二者比较，LAB法手续较简便，但灵敏度较低。

生物素—抗生物素染色法采用免疫细胞化学染色中各种常用固定剂（见附录），均可获得较满意的结果。但有实验报告推荐“PLP”固定液（即过碘酸—赖氨酸—多聚甲醛固定液），其配制法亦见附录。PLP固定后，依次经系列蔗糖磷酸缓冲液（10%，15%，20%各5min），进行冰冻切片，贴于载片上，置室温风干30min或37℃3～4h或过夜。染色前用PBS湿润水化切片，可获得满意染色效果。