【岐黄之术】

3.标记生物素—抗生物素技术(Labelled Avidin—Biotin technique, LAB技术)

《实用免疫细胞与核酸》书籍目录

以生物素标记抗体作第一抗体,酶标记抗生物素作为第二抗体(图6-3)。操作步骤如下:

LAB技术

图6-3 LAB技术

(1)切片在含有25~50μg/ml生物素标记抗体(PBS液稀释)中孵育1h,室温。

(2)PBS洗2次,每次5min。

(3)用20~50μg/ml过氧化物酶标记的抗生物素液孵育90min,水洗。

(4)酶呈色反应。

BRAB法和LAB示是Guesdon及其同事们(1979)建立的,由于这二种方法都需以生物素标记第一抗体,应用不如ABC法普遍。但用于免疫细胞中免疫球蛋白的显示具有特异性。二者比较,LAB法手续较简便,但灵敏度较低。

生物素—抗生物素染色法采用免疫细胞化学染色中各种常用固定剂(见附录),均可获得较满意的结果。但有实验报告推荐“PLP”固定液(即过碘酸—赖氨酸—多聚甲醛固定液),其配制法亦见附录。PLP固定后,依次经系列蔗糖磷酸缓冲液(10%,15%,20%各5min),进行冰冻切片,贴于载片上,置室温风干30min或37℃3~4h或过夜。染色前用PBS湿润水化切片,可获得满意染色效果。

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