第七节 PCR仪器的发展
PCR温度循环至关重要，PCR扩增仪各参数必须准确。自Perkin –Elmer Cetus公司第一台PCR扩增仪问世以来，现已有几十家不同的厂家在国内外生产和销售PCR扩增仪。在短短的几年间，扩增仪经过几代的发展，不断采用新技术，并且进一步朝方便、实用、高智能化和自动化的方向发展。
为了便于了解和选购适宜的PCR实验设备，现将部分国内外PCR扩增仪列表如下（表22-5）；这些仪器主要用变温铝块、变温水浴及变温气流的方式达到热循环的目的，各有其优缺点。国产1109型DNA扩增仪则是用恒温浴机械手移位式。更接近于手工操作。PTC-51A/B体积小，智能化与自动化程序高，可以兼做套式PCR，方便实用。以上各种仪器一般都配有微电脑自动控制温度、时间及循环数，可以达到节 省劳动力的目的。在采用这些仪器作PCR试验之前，一般均应实测管内温度变化循环情况，以了解升、降温时管内因热传导造成的温度滞后情况和实际到达的最高、最低温度，用于修正设计的循环参数。温度滞后受到所用Eppendorf管材料、壁厚及形状（与铝块孔匹配程度）的影响，这对变温铝块式仪器影响更大些。对于配用制冷机式半导体元件致冷的仪器，在使用低于室温的温度来保冷PCR反应后小管时，应注意冷凝水的问题，勿使流入仪器内浸湿半导体元件而损坏仪器。
表22－5 国内外生产的几种DNA扩增仪
| 仪器型号 | 生产厂家 | 型式 | 特点 | 管数 | 报价 |
| 1109型 | 北京新技术所与军科院联合 | 机械臂 变温水浴 | 电子调温 | 40×0.5ml | 16400元/台 |
| 90A/B型 | 中科院遗传所 | 机械臂 变温水浴 | 电热 | 14000元/台 | |
| PTC-51A/B型 | 军事医学科学院 | 变温气流 | 电子调兼作套式 | 30×0.5ml | 12000元/台 |
| DNA Thermal Cycler | Perkin –ElmerCetus(美) | 变温铝块 | 压缩机致冷 | 48×0.5ml | US $ 20000.- |
| Thermocycler 60 00 180 | B..Braun Biotech (德) | 变温水浴98℃四档 | 电热,自来水冷却 | 60×1.5ml 100×1.5ml 180×1.5ml | DM 30000.- |
| Automatic temperature Cy-cler Single Block Twin Block | Ericomp Inc.(美) | 变温铝块25～100℃ | 电热,自来水冷却 | 29×1.5ml 58×1.5ml | US $4985.- US $7980.- |
| Grant Autogen | Grant Instrumant Ltd(美) | 变温水浴0～99℃ | 电热,自来水冷却或加冷循环器 | 50×1.5ml or 50×1.5ml | US $250. –plus US $ 15.-for Rack(x2) |
| Techne PHC-1 PHC-2 | Techne Ltd.(英) | 变温铝块0～99℃三档 | 电热500W水冷100W | 54×0.5ml 54×0.5ml 24×1.5ml | ￡3383. – ￡3997. - |
| BioOven | BioThrm Corp(美) | 变温气流 -150℃ | 115V11A | 200’s of 4×96plate | US $ 2990. - |
| Trio-Thermo-block TB-1 | Biomertra(德) | 半导体变温 | 220V | 3×20管 分别控温 | DM12900. - |
| Micro cycler E | Eppendorf(美) | 变温铝块 | 220V/100V | 3×29管 | US |
- PCR仪器的发展《实用免疫细胞与核酸》
- PCR实验中常见问题对策《基因诊断与性传播疾病》
- PCR应用领域《实用免疫细胞与核酸》
- PCR扩增产物的分析法《基因诊断与性传播疾病》
- PCR应用特点《实用免疫细胞与核酸》
- PCR介导的信号转导途径《细胞和分子免疫学》
- PCR与原位杂交细胞化学结合法《实用免疫细胞与核酸》
- PCR技术的原理《实用免疫细胞与核酸》
- PE、社会药学与医院药学的关系《医院药学》
- PCR缓冲液《实用免疫细胞与核酸》
- PEEP和CPAP的应用《急诊医学》
- PCR方法《基因诊断与性传播疾病》
- PE-标记蛋白A方法《实用免疫细胞与核酸》
- PCR反应的基本条件及其对PCR的影响《基因诊断与性传播疾病》
- PG《生物化学与分子生物学》
- PCR法《生物化学与分子生物学》
- PG、TX及LT的生理功能《生物化学与分子生物学》
- PCR的特点《基因诊断与性传播疾病》
- pH对反应速度的影响《生物化学与分子生物学》
- PCR的基本原理和基本程序《基因诊断与性传播疾病》
- pH梯度法《胃肠动力检查手册》
- PCR操作范例《实用免疫细胞与核酸》
- PH值测定（电位法）《中国生物制品规程》
- PCR标本的制备《基因诊断与性传播疾病》
- PH值与缓冲溶液《医用化学》
- PCR-SSCP分析技术《实用免疫细胞与核酸》
- PH值在医学上的应用《医用化学》
- PCO2、H+和PO2在影响呼吸中的相互作用《生理学》
- PKC的亚类及其结构特点《细胞和分子免疫学》
- Parry-Romberg氏综合征《神经精神疾病诊断学》
- PKC的转位与激活《细胞和分子免疫学》
《实用免疫细胞与核酸》
- 前言
- 第一章 总论
- 第一节 有关的免疫学理论（缺）
- 第二节 免疫细胞化学的有关技术概述
- 第三节 有关细胞和组织学技术
- 参考文献
- 第二章 抗原和抗体的制备
- 第一节 抗原的制备（缺）
- 第二节 抗体的制备
- 第三节 抗体的提取与纯化（缺）
- 第三章 免疫荧光细胞化学技术
- 第一节 免疫荧光细胞化学的原理
- 第二节 荧光抗体的制备
- 一、荧光素
- （一）异硫氰酸荧光素（Fluoresceinisothiocyanate, GITC）
- （二）四乙基罗达明（tetraethylrodamineB200, RB200）
- （三）四甲基异硫氰酸罗达明（tetramethylrhodamineisothiocyanate, TMRITC）
- 二、荧光素标记抗体的方法
- 三、荧光抗体质量控制
- 四、荧光抗体的保存
- 第三节 免疫荧光细胞化学染色方法
- 第四节 荧光显微镜检查法
- 第五节 非特异性染色的消除方法
- 参考文献
- 第四章 免疫酶细胞化学
- 第一节 固定和切片
- 第二节 染色方法
- 第三节 结果分析
- 第四节 ICC的几种特殊应用
- 参考文献
- 第五章 免疫金银及铁标记技术
- 第一节 免疫金技术发展史
- 第二节 溶胶的基本概念
- 第三节 胶体金的制备方法
- 一、制备胶体金的准备
- 二、制备胶体金的方法和步骤
- 第四节 胶体金的质量鉴定
- 第五节 胶体金标记物的制备
- 第六节 免疫胶体金银细胞化学染色的固定剂选择
- 第七节 光镜免疫金银细胞化学方法
- 第八节 免疫胶体铁细胞化学
- 参考文献
- 第六章 亲合组织化学技术及免疫细胞化学技术的某些进展
- 第一节 抗生物素—生物素免疫细胞化学染色法
- 一、基本原理
- 二、几中抗生物素—生物素染色法
- 第二节 葡萄球菌蛋白A（SPA）
- 第三节 凝集素
- 第四节 免疫细胞化学技术的某些新进展
- 参考文献
- 第七章 电子显微镜免疫细胞化学技术
- 第一节 电子显微镜免疫细胞化学技术概述
- 第二节 免疫铁蛋白技术
- 第三节 免疫酶细胞化学技术
- 第四节 免疫电镜胶体金标记法
- 第五节 其它免疫电镜技术
- 参考文献
- 第八章 蛋白质与多肽激素的放射免疫分析
- 第一节 概述
- 第二节 放射性碘标记
- 一、同位素的选择
- 二、蛋白质与多肽激素的放射性碘标记
- 三、放射性标记化合物的纯化与鉴定
- 第三节 结合和游离部分的分离
- 第四节 样品的前处理
- 第五节 放射免疫分析法的建立
- 参考文献
- 第九章 免疫细胞化学与图像分析
- 第十章 流式细胞术（FCM）在免疫细胞化学中的应用
- 第一节 流式细胞术简介
- 第二节 FCM在生物医学工程学方面的应用
- 第三节 FCM对外周白细胞的免疫荧光分析
- 参考文献
- 第十一章 免疫细胞化学在神经科学中的应用
- 一、确定神经递质的性质、定性和分布
- 二、探查和发现新的神经递质
- 三、追踪神经束的行径及其投射区
- 四、区别神经细胞、神经胶质细胞和神经内分泌细胞
- 五、研究神经递质的超威结构定位
- 六、神经递质共存的研究
- 七、个体和种族发育的研究
- 八、与神经组织培养技术相结合进行神经生物科学的研究
- 九、应用于受体的研究
- 十、神经系统的机能研究
- 第十二章 肿瘤免疫细胞化学
- 第一节 神经肿瘤免疫细胞化学
- 第二节 神经内分泌肿瘤免疫细胞化学
- 第三节 软组织与骨肿瘤细胞化学
- 第四节 免疫活性细胞及其肿瘤的免疫细胞学
- 一、免疫活性细胞的免疫细胞化学
- 二、恶性淋巴瘤的免疫细胞化学标记
- 第五节 上皮组织肿瘤免疫细胞化学
- 参考文献
- 第十三章 消化器官免疫细胞化学
- 第一节 胃肠道粘膜免疫细胞化学特点
- 第二节 胃肠道粘膜抗体产生细胞
- 第三节 消化道分泌生IgA
- 第四节 胃肠道粘膜T淋巴细胞
- 第五节 癌胚抗原的免疫细胞化学
- 第六节 胃肠道溶菌酶
- 第七节 消化管壁内神经丛的免疫细胞化学
- 第八节 肝脏疾病免疫细胞化学
- 参考文献
- 第十四章 肾脏疾病免疫细胞化学
- 第一节 免疫细胞化学技术在肾脏疾病中的应用范围
- 第二节 荧光或酶标抗体在肾脏内显示的部位及形式
- 第三节 免疫细胞化学技术在肾脏疾病中应用的意义
- 第四节 各种肾脏疾病的病变以及免疫荧光（酶标）表现特征
- 一、原发性肾小球疾病
- 二、继发于全身性疾患的肾小球疾病
- 三、结缔组织病时的肾脏损害
- 四、血管性疾患导致肾脏的损害
- 五、代谢性疾患引起的肾脏损害
- 六、某些特殊疾病时的肾脏损害
- 七、遗传性和先天性肾病
- 八、杂病
- 九、肾移植
- 十、肾小管间质性疾病
- 参考文献
- 第十五章 自身抗体的免疫组织化学检测方法和应用
- 第一节 自身抗体的免疫组织化学检测方法
- 第二节 在研究和诊断自身免疫性疾病中的应用
- 一、抗核抗体（Antinuclearantibodies, ANA）的检测
- 二、双链DNA抗体（Double strand DNA antibody, dsDNA）的检测方法和应用
- 三、抗核仁抗体的检测法
- 四、抗组蛋白抗体的检测方法
- 五、抗着丝点抗体的检测方法
- 六、抗甲状腺自身抗体（ThyroidAutoantiodies）的检测方法
- 七、平滑肌抗体（Smooth muscle antibody , SMA）的检测
- 八、肝细胞膜抗体（Antibodyto the hepatocyte membrane, HMA）的检测
- 九、线粒体抗体（Mitochondrial antibody, AMA）
- 十、胃壁细胞抗体（Gastricparietal cell antibodies, PCA）的检测
- 十一、胃泌素细胞抗体（GastrinCell antibodies, GCA）的检测
- 十二、胰岛细胞抗体（Isletcell antibady, ICAb）的检测
- 十三、抗肾小球和肺泡基底膜抗体的检测
- 十四、抗皮肤成分自身抗体的检测
- 十五、唾液腺外分泌导管上皮自身抗体的检测
- 十六、抗横纹肌自身抗体的检测
- 十七、肾上腺自身抗体的检测
- 十八、类风湿因子（Rheumatoidfactor）的检测
- 十九、抗中性白细胞胞浆自身抗体（Anti－eutrophilcytoplasmic autoantibody ANCA）
- 二十、增殖细胞核抗原抗体（Proliferativecell nuclear antigen antibody, PCNA）
- 二十一、抗类风湿关节 炎相关核抗原的抗体（Antirheu－matoidarthritis associated nuclear antigen antibody, RANA）
- 二十二、抗精子抗体（Anti-spermantibody, ASA）
- 二十三、其他自身抗体的检测
- 第三节 自身抗体产生的机理
- 参考文献
- 第十六章 病原体的免疫细胞化学快速检查方法和应用
- 第一节 在细菌学中的应用
- 一、甲组溶血性链球菌的快速检查法
- 二、脑膜炎双球菌的快速检查法
- 三、霍乱弧菌和副霍乱弧菌的快速检查法
- 四、鼠疫杆菌的快速检查法
- 五、炭疽杆菌的快速检查法
- 六、致病性大肠杆菌的快速检查法
- 七、结核杆菌的快速诊断方法
- 八、其他细菌的快速检查方法
- 九、钩端螺旋体的检查法
- 十、梅毒螺旋体的检查法
- 第二节 在病毒学中的应用
- 第三节 在寄生虫学中的应用
- 第四节 在真菌学中的应用
- 参考文献
- 第十七章 免疫细胞化学在皮肤病学的应用
- 第一节 角朊细胞
- 第二节 黑素细胞及其肿瘤
- 第三节 Merkel细胞
- 第四节 郎格罕细胞
- 第五节 真皮与表皮交界
- 第六节 免疫细胞化学技术在真皮纤维化性疾病研究中的应用
- 第七节 真皮浸润细胞免疫表达
- 第八节 汗腺及汗腺肿瘤的免疫细胞化学特点
- 参考文献
- 第十八章 核酸分子杂交技术概述
- 第一节 核酸的分子结构
- 第二节 DNA的变性与复性
- 第三节 分子杂交
- 第四节 石蜡包埋组织的DNA提取及其应用
- 参考文献
- 第十九章 核酸（基因）分子探针
- 第一节 概述
- 第二节 核酸（基因）探针目的核酸的制备技术
- 第三节 放射性同位素标记核酸探针
- 第四节 非放射性标记的核酸探针
- 一、生物素标记核酸探针方法
- 二、光敏生物素标记核酸探针
- 三、生物素-补骨脂素（Biotin -psoralen）标记法
- 四、生物素-α-氨基乙酸-N-羟基琥珀标记化学修饰的DNA法
- 五、缺口平移法标记生物素DNA探针（二步法）
- 六、生物素随机引物标记探针方法
- 七、异羟基洋地黄毒甙（Digoxigenin）标记核酸探针
- 八、光敏2，4-二硝基苯（光敏DNP）标记DNA法
- 九、三硝基苯磺酸（TNBS）标记核酸探针
- 十、生物素化的RNA探针标记
- 十一、辣根过氧化物酶标记核酸探针法
- 十二、用聚合酶链反应标记高活性DNA探针
- 第五节 寡核苷酸探针的制备
- 参考文献
- 第二十章 原位杂交组织化学
- 第一节 原位杂交组织化学概述
- 第二节 cRNA探针在原位杂交组织化学（ISHH）中的应用
- 第三节 DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的应用
- 第四节 原位杂交组织化学与免疫细胞化学结合法
- 第五节 原位杂交免疫细胞化学技术的未来与展望
- 参考文献
- 第二十一章 原位杂交技术在染色体和电镜水平的应用
- 第一节 原位杂交技术在染色体铺片的应用
- 一、有关染色体的基本知识及制片
- 二、应用ISHH技术对染色体制片、基因分配（Chromosomalassignment of genes）的研究
- 三、利用ISHH技术对肿瘤或癌前组织的细胞间期染色体铺片进行研究
- 四、利用性染色体特异性DNA探针的ISHH技术
- 第二节 原位分子杂交技术在电镜水平的应用
- 一、应用同位素标记cRNA探针电镜原位杂交技术于染色体制片（Hutchison et al,1982）
- 二、应用生物素标记DNA探针电镜原位杂交技术
- 三、应用地高辛标记rRNA探针的电镜原位杂交技术
- 四、结语
- 参考文献
- 第二十二章 聚合酶链反应（PCR）技术的发展和应用
- 第一节 概述
- 第二节 PCR技术的原理
- 第三节 PCR操作范例及反应体系的组成
- 第五节 PCR各处应用模式
- 一、兼并引物（DegeneratePrimer）PCR
- 二、套式引物（NestedPrimer）PCR
- 三、复合PCR（Multiplex PCR）
- 四、反向PCR（Inverse PCR或Reverse PCR）
- 五、不对称PCR（Asymmetric PCR）
- 六、标记PCR（LP-PCR）和彩色PCR
- 七、加端PCR
- 八、锚定PCR或固定PCR
- 九、玻片PCR
- 十、反转录PCR方法检测RNA
- 十一、定量PCR
- 第六节 样品处理与注意事项
- 第七节 PCR仪器的发展
- 第八节 PCR临床应用领域及特点
- 第九节 其它链扩增技术及应用范围
- 一、免疫PCR
- 二、转录依赖的扩增系统（Transcription-basedAmplification System , TAS）
- 三、再生式序列复制技术（3SR）
- 四、连接酶链式反应（Ligase ChainReaction,LCR）
- 五、PCR-SSCP分析技术
- 六、结语
- 参考文献
- 第二十三章 DNA重组技术及其在基因诊断中的应用
- 第一节 工具酶
- 一、DNA限制性内切酶
- 二、甲基化酶
- 三、分子克隆化的另一些酶
- 第二节 分子克隆载体
- 第三节 DNA重组实验中常用的技术
- 第四节 遗传病与肿瘤的基因诊断
- 第五节 “DNA指纹”与法医鉴定
- 参考文献
- 附录
- 附录一 免疫细胞化学常用试剂介绍
- 附录二 原位杂交组织化学常用试剂及处理
- 附录三 全血细胞培养染色体技术常用试剂配制
- 附录四 实验室常用技术参数资料
- 本书常用缩写词
