1．冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术

（1）新鲜或固定的细胞进行直接法或间接法免疫标记。

（2）PBS（pH7.5）冲洗3min×2，加入1mmol/l MgCl₂蒸馏水洗洗3min×3，离心沉集细胞。

（3）将细胞团置于小纸板上，入液氮冷却的Freon中，取出入冷冻蚀刻仪中进行断裂操作，再于-100^℃蚀刻1min 。

（4）制做断裂面复型。

（5）再次氯酸钠清洗复型，蒸馏水洗后进行观察。

本法可显示断裂暴露的PF位于中央，周围则是蚀刻后露出来的ES，标记物只出现在ES上。