第二节　cRNA探针在原位杂交组织化学（ISHH）中的应用

Angerer及其同事们首先应用RNA探针于原位杂交（见Cox et al 1984），核酸探针为单链的RNA分子，产生自具有质粒逆转录系统的cDNA克隆（图20-2）。由于它是单链的，不像双链的DNA探针，在溶液中不会再退火（reanneal），因此，较大百分比的探针可参与杂交反应，较cDNA探针的信号强。除此之外，在溶液中产生的cRNA-mRNA杂交体比相应的cDNA-mRNA杂交体稳定，但在原位杂交中是否如此尚未证明。cRNA探针不足之处在于有时比DNA探针粘性强（stickier）。可与组织产生较高的非特异性结合，但此缺陷可在杂交后漂洗液中加用酶漂洗来解决。最近，Wolf等（1987）建议插入确定长度的寡核苷酸至载体内产生cRNA分子，这种cRBA分子称为“寡核苷酸核酸探针”（oligoribo－probes）已被成功的用于原位杂交实验。

图20-2　示cDNA转录为cRNA，可标记以不同的标记物，然后与细胞中的mRNA相结合。Biotin(生物素)，Au(金)，digo-（地高辛）