二、细胞培养（Bhatl B和McGee JOD,1990）

1．完全培养基

RPMI76.0ml

胎牛血清 20.0ml

植物凝集素2.0ml

抗生素/抗菌素溶液（100×）1.0ml

L-谷氨酰胺（100×）　1.0ml

2.BudR(5’-Bromo-2-deoxyuridine,5’-溴-2-脱氧尿嘧啶)溶解10mg/ml BudR于dH₂O中，0.2μm滤膜过滤除菌，分装后-20℃储存，BudR要在柔光（弱光）下操作。

3．胸腺嘧啶（Thymidine,Thd）按250μg/ml溶解于dH₂O中，过滤后分装储存于-20℃。

4．Colcemid(Sigma)5.0μg/ml溶于dH₂O中，过滤后分装储存于-20℃。

5．KCl（0.75mol/L）溶解560mg于100ml dH₂O中，新鲜配制37℃保存。

6．固定剂甲醇冰醋酸按3：1（V/V）混合即可，现用现配，置冰上待用。

7．缺口平移试剂盒（Amersham和BRL公司）

8．生物素7-dATP(BRL)

9.糖原（BRL）

10．RNA酶A（Sigma）

（1）储备液

称取RNA酶A 1g溶于100ml醋酸钠中，置沸水中煮10min，分装后储于-20℃。

（2）工作液

用储备液按1：100稀释。

11．20×SSC

NaCl　 175g

柠檬酸三钠 88g

dH₂O1000ml

固定试剂溶解后，dH₂O定容至1000ml，调pH至7.4，高压灭菌。

12．杂交液（高深度，HMmix）

去离子甲酰胺　 6.0ml

100×Denhardt’s液1.0ml

50%硫酸葡聚糖 2.0ml

1%人或鲑精DNA^※

20×SSC

※：临用前加入，终浓度为100～200μg/ml。

该液为高浓度杂交液， 存于4℃。

13．PBT液

BSA　 5%

TristonX-100/(PBS) 0.1%

注：BSA液用前应用Whatman 3mm滤纸过滤。

14．兔抗生物素（α-生物素）单克隆抗体

用PBT液1：100稀释。

该单抗现可从英国Dako公司购得。

15．金（10～20nm）标羊抗兔二抗

用PBT液1：50稀释。

16．银溶液（Janesen）

17.Hoedst33258（Sigma）

储备液（100×）

Hoedst染料 5mg

甲醇　 10ml

工作液：用2×SSC 1：100稀释储备液。