五、对照试验

为了保证免疫荧光细胞化学染色的准确性，排除某些非特异性染色，必须在初次试验时进行以上对照试验：

1．直接法　需设下述对照试验

（1）标本自发荧光对照：标本只加PBS或不加PBS，缓冲甘油封片，荧光显微镜观察应呈阴性荧光（无与特异性荧光相似的荧光）。

（2）抑制试验：可分为二步法和一步法。

①二步抑制法：标本先加未标记的特异性抗体，再加标记荧光抗体，结果应呈阴性或明显减弱的荧光。

②一步抑制法：先将荧光抗体用未标记抗体作适量混合，再加在标本上染色，结果应为阴性。此法效果较二步法好，并且简便。

（3）阳性对照：用已知阳性标本作直接法免疫荧光染色，结果应呈阳性荧光。

如对照（1）和（2）无荧光或弱荧光，（3）和待检查标本呈强荧光即为特异性阳性荧光。

2．间接法

（1）自发荧光对照：同上（一）。

（2）荧光抗体对照：标本只加间接荧光抗体染色，结果阴性。

（3）抑制试验：同上。

（4）阳性对照：同上。

如对照（1）、（2）、（3）均呈阴性，阳性对照和待检标本阳性则为特异性荧光。

3．补体法

（1）自发荧光对照

（2）荧光抗体对照

（3）抑制试验

（4）补体对照：取新鲜豚鼠血清1：10稀释先作用标本，再用抗补体荧光抗体染色，结果阴性。

（5）抑制试验：标本加灭活的第一抗体，再用1：10稀释度的新鲜豚鼠血清孵育后，再加未标记的抗补体血清与抗补体荧光抗体等量混合稀释液，结果应为阴性。

（6）阳性对照：（1）～（5）结果阴性，（6）和待检标本阳性时，则为特异性荧光。