四、电镜标本的制备方法

《实用免疫细胞与核酸》书籍目录

1.固定  同常规电镜一样,应用醛类和四氧化锇双固定,以维持细胞和组织的超威结构。有文献报告以4%的甲醛溶液在pH7.2的磷酸缓冲内,在0℃进行固定,并用四氧化锇作后固定,不会影响抗原的反应能力。高锰酸钾能使大部分抗原失去活性,一般不宜采用。另外,铁蛋白标记抗体的特点之一是分子量大。因此,如用于细胞表面抗原的定位研究,可将样品直接放入固定液,否则需采取适当的措施,打破细胞膜,增强细胞对标记抗体的通透性,常采取以下方法:

(1)冻融法:将小块组织或细胞经固定后,冻融一次,使细胞膜破裂,标记抗体能进入细胞内。

(2)冰冻切片法:固定后组织快速冷冻,切成10~15μm左右薄片,溶化的切片直接浸泡于铁蛋白标记抗体液中。

(3)有报道经戊干杯固定后,浸入4×10-3mol/L洋地黄皂甙液中1~2min,能有助于增强细胞膜的穿透性,使标记抗体液进入细胞内。

2.免疫反应处理  常用包埋前染色,分直接法和间接法两种。在染色前,将组织切成约10~20μm厚的薄片。

(1)直接法:将薄片直接浸泡于标记抗体液中,室温或37℃作用1~2h或更长;缓冲液(有人提倡用冷缓冲液)浸漂,除去未结合的标记抗体溶液,然后转入常规双固定和电镜包埋。

(2)间接法:

①将组织切片浸于第一抗体液中,室温30~60min。

②以大量冷缓冲液充分搅拌洗涤,至少3次,每次30min。

③浸入铁蛋白标记抗体液中,室温30min。

④如②,用缓冲液充分洗涤后,可以自然沉淀或用离心方法捞取组织片。

⑤将离心沉淀小块,用四氧化锇固定30min。

⑥常规电镜脱水、包埋、切片、染色和观察。

1000余本中医古籍txt电子书免费下载

下载《实用免疫细胞与核酸》 电子书打不开?

下载所有中医书籍

返回《实用免疫细胞与核酸》书籍目录
  1. 电镜标本的制备方法《实用免疫细胞与核酸》
  2. 电解质溶液《医用化学》
  3. 电镜标本制备方法《实用免疫细胞与核酸》
  4. 电解质及酸碱平衡紊乱《病理生理学》
  5. 电镜水平的免疫金染色法《实用免疫细胞与核酸》
  6. 电殛秘方《华佗神方》
  7. 电灸器《中医词典》
  8. 电极电位的产生《医用化学》
  9. 电离辐射《预防医学》
  10. 电极电位的测定《医用化学》
  11. 电离辐射的远期效应《核、化学武器损伤》
  12. 电击伤(触电)《家庭医学百科-自救互救篇》
  13. 电离辐射对营养素代谢的影响《临床营养学》
  14. 电击的急救处理《急诊医学》
  15. 电离辐射生物学效应《核、化学武器损伤》
  16. 电击《默克家庭诊疗手册》
  17. 电疗法《康复医学》
  18. 电话呼救须知《家庭医学百科-自救互救篇》
  19. 电气治病《对山医话》
  20. 电化学发光免疫测定《免疫学和免疫学检验》
  21. 电热灸《中医词典》
  22. 电光夜照《目经大成》
  23. 电生理检查《神经病学》
  24. 电光夜照《中医词典》
  25. 电生理学试验《默克家庭诊疗手册》
  26. 电磁波与射线《医学微生物学》
  27. 电睡眠疗法《理疗学》
  28. 碘在人体内的含量《临床营养学》
  29. 电位法测定溶液的PH值《医用化学》
  30. 碘缺乏病《预防医学》
  31. 电兴奋疗法《理疗学》