十八、类风湿因子(Rheumatoidfactor)的检测

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类风湿因子是一种抗轻度变性的IgG的自身抗体,可与人或动物的热聚合IgG或抗原结合的IgG(即免疫复合物中的IgG)反应,而不与正常IgG反应。类风湿因子为IgM类抗体。主要见于类风湿性关节 炎产现人血清和组织中。

1.直接法

(1)用病人关节 滑膜或淋巴结,冰冻切片,冷丙酮固定10min。

(2)标记变性IgG或球蛋白:取人血清提取的γ球蛋白(20~25mg/ml),按常规法标记FITC,去游离荧光素后,将标记溶液置63水浴加热10min,使γ球蛋白热变性。加入40%2.17mol/L硫酸钠使热聚合体沉淀,置冰箱4h(4℃),然后在低温下离心30min(10000rpm)。取沉淀以预冷至4℃的蒸馏水溶解至原体积半量。用蒸馏水透析24h(4~6),再用pH7.6生理盐水透析24h。高速离心(12000rpm)30min除去不溶性聚合物,取上清分装,-20保存备用。

(3)直接免疫荧光染色:切片分别用以下染色试剂处理

①加标记变性γ球蛋白溶解。

②加标记抗IgM或γ球蛋白荧光抗体。

③加未标记变性γ球蛋白,作用切片后,洗涤,再加标记变性γ球蛋白。

①,②在适当稀释的试剂染色后呈特异性荧光,大多数活动性类风湿性关节 炎,可见阳性荧光的浆细胞堆集。③阴性或荧光显著减弱。

2.间接法 用以检出病人血清中的类风湿因子。

抗原:用溶血素致敏的绵羊血细胞涂片。丙酮固定10min。

常规间接法染色。病人血清中有类风湿因子,与绵羊红细胞上的溶血素(变性IgG)结合,再加入γ球蛋白荧光抗体,与类风湿因子结合。因而红细胞呈现亮明的荧光,即证明类风湿因子阳性。

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