十八、类风湿因子（Rheumatoidfactor）的检测

类风湿因子是一种抗轻度变性的IgG的自身抗体，可与人或动物的热聚合IgG或抗原结合的IgG（即免疫复合物中的IgG）反应，而不与正常IgG反应。类风湿因子为IgM类抗体。主要见于类风湿性关节　炎产现人血清和组织中。

1．直接法

（1）用病人关节　滑膜或淋巴结，冰冻切片，冷丙酮固定10min。

（2）标记变性IgG或球蛋白：取人血清提取的γ球蛋白（20～25mg/ml），按常规法标记FITC，去游离荧光素后，将标记溶液置63^℃水浴加热10min，使γ球蛋白热变性。加入40%2.17mol/L硫酸钠使热聚合体沉淀，置冰箱4h（4℃），然后在低温下离心30min（10000rpm）。取沉淀以预冷至4℃的蒸馏水溶解至原体积半量。用蒸馏水透析24h（4～6^℃），再用pH7.6生理盐水透析24h。高速离心（12000rpm）30min除去不溶性聚合物，取上清分装，-20^℃保存备用。

（3）直接免疫荧光染色：切片分别用以下染色试剂处理

①加标记变性γ球蛋白溶解。

②加标记抗IgM或γ球蛋白荧光抗体。

③加未标记变性γ球蛋白，作用切片后，洗涤，再加标记变性γ球蛋白。

①，②在适当稀释的试剂染色后呈特异性荧光，大多数活动性类风湿性关节　炎，可见阳性荧光的浆细胞堆集。③阴性或荧光显著减弱。

2．间接法 用以检出病人血清中的类风湿因子。

抗原：用溶血素致敏的绵羊血细胞涂片。丙酮固定10min。

常规间接法染色。病人血清中有类风湿因子，与绵羊红细胞上的溶血素（变性IgG）结合，再加入γ球蛋白荧光抗体，与类风湿因子结合。因而红细胞呈现亮明的荧光，即证明类风湿因子阳性。