八、光敏2,4-二硝基苯(光敏DNP)标记DNA法
光敏DNP由一连接臂组成,一端是2,4-二硝基苯,另一端有芳基叠氮化合物。此法适用于含氨基检测基团。其敏感性和光敏生物素标记探针相同,检测时需要抗DNP抗体和免疫化学显色。标记方法:(1)DNA不心变性,必须溶于水中,取2~10μg10μl,加入二甲亚砜25μl,每微克DNA加入光敏DNp 2μg(在避光条件下),混匀。(2)置入冰浴中,在特制灯10cm下照射10min。(3)加入水165μl,4mol/L醋酸钠20μl和异丙醇50μl,混匀。(4)用705和无水乙醇沉淀各一次,晾干,按50μg/ml溶于200μl水中,如探针不溶时,可在60℃水溶中加热10min,离心5min,除去不溶性杂质,分装,-20℃可保存1~2年。此法简便,不仅适用于核酸标记,也适用于蛋白质标记。
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