四、免疫金及免疫金银技术的优点
免疫金银技术(Immunogold—sliver Technique)是在免疫金基础上发展的新兴的先进的免疫细胞化学检测技术,它比免疫荧光,免疫酶标技术有许多独特的优点。
1.制备方法简单,易行。
2.标记简单抗体、凝集素、酶、SPA、激素等很容易通过物理吸附作用与胶体金颗粒相结合形成稳定的金标复合物。由于在标记过程中不需要经过任何化学方法交联,抗体的生物活性可保持不变,标记方法简单容易。
3.适用范围广 胶体金银技术既能用于光镜也能用于透射及扫描电镜,同时还可用于X线能谱分析。在荧光显微镜上添置一块特制的滤板(IGs filter block)还可直接对胶体金颗粒进行观察,金颗粒在荧光显微镜下呈现明亮的点状物,定位准确,敏感性高,标本可长期保存。
4.特异性强免疫金探针的非特异性吸附作用小,较少受生物组织背景因素的影响,在抗原或抗体的检测中显示出高度的特异性。
5.敏感性高由于金颗粒的电子密度很大特别适合透射电镜及扫描电镜,因此,免疫金银法用于电镜,其检测抗原或抗体率远远超过酶反应物,从而大大改进了免疫细胞化学技术在电镜水平上的分辨率。光镜下金颗粒经过银显影后得到放大,用于检测组织细胞抗原时其敏感性比PAP法高200倍。我们检测肝炎表面抗原时比ABC法高6倍,是至今为止最为敏感的免疫细胞化学方法,特别适合于检测微量抗原及石蜡切片标本中的微弱抗原。
应用彩色IGSS和IGSS双标及多标记,可在同一张切片上检测两种以上的抗原成份。胶体金可以制备成不同大小的颗粒,将不同直径的胶体金分别标记不同的抗体或抗原,可以在同一张标本上同时区分出两种或两种以上的抗原或抗体,非常适用于电镜水平的双标和多标记,为研究细胞内抗原及多种抗原的表达及各种抗原分子相互之间的关系等提供了最佳手段。
免疫金银技术是新兴的科学技术,目前许多实验室越来越广泛地采用这一新技术,从而使它的发展有了扎实的基础。用免疫荧光、免疫酶技术、放射免疫技术可做的工作,均可使用免疫金银技术。另外,这一新的方法在其它技术的配合下不断地得到更新与进步,使它能经常增添新的内容,特别是免疫金和胶体金示踪作为一门独特的新技术将在生物医学及其它领域的研究中发挥着越来越大的作用。
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