二、胶体金pH值的调整

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胶体金与蛋白质的结合成功与否,取决于pH值,一般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢固地结合,因此,标记之前须将胶体金溶液的pH值调至待标记蛋白质的等电点略偏碱。需要提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3,需要降低胶体金的pH值时可用0.1n HCl。测定金溶液的pH可能损害pH测定计的探头,因此,一般用精密的pH试纸测定其pH即可。

几种常用的蛋白质标记时胶体金所用的pH值见表5-4。

表5-4 常用几种蛋白质标记时胶体金所用的pH值如下

蛋白质pH
抗体(γ球蛋白)9.0
亲合层析的IgG7.6
单克隆抗体8.2
F(ab')27.2
SPA(葡萄球菌蛋白)6.0
蓖麻子植物凝血素Ⅰ8.0
麻子植物凝血素Ⅱ8.0
花生凝集素6.3
Helix pomatia lectin7.4
大豆凝集素6.1
Lens Culinaris lectin6.9
Lotus Tetragonolobus lectin6.3
荆豆凝集素6.3
Bandeirae simplicifolia lectin6.2
过氧化物酶8.0
类卵粘蛋白4.8
血浆铜兰蛋白7.0
α-胎球蛋白6.5
牛血清白蛋白6.5
牛血清白蛋白5.5
牛血球白蛋白结合肽4.5
牛血清白蛋白结合胰岛素5.3
霍乱毒素6.9
破伤风毒素6.9
DNAase6.0
RNAase9.0
低密度脂蛋白5.5
α2-巨球蛋白6.0
抗生物素蛋白(亲合素)10.0
链霉抗生物素蛋白6.6
麦胚凝集素9.9

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