3.PAP包埋前染色法(Pickel 等,1975)
经固定组织、应用振动切片机(Vibratome)切35~50μm厚片,或用组织铺片,以漂浮法在反应板上进行下列步骤:
(1)正常羊血清(1:30PBS稀释),室温孵育30min。
(2)第一抗体(A种动物抗血清),4℃湿盒中48~72h。
(3)羊抗A种动物血清(1:100)室温30min。
(4)A种动物血清PAP复合物(1:100)室温30min。
(5)DAB·4HCl/H2O2(0.05%/0.01%),室温1.5min。上述每一步骤后应用PBS洗涤(5min×3次)。
(6)在解剖显微镜下检出免疫反应阳性部位,修整组织,用0.1mol/L磷酸缓冲液稀释的1%锇酸(pH7.4)后固定30min~1h。
(7)按常规电镜样品制备,脱水、包埋、超薄切片、染色观察。
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