二、电泳分类法

《动脉粥样硬化》书籍目录

根据脂蛋白的电泳迁移率进行分类

血浆脂蛋白是人体脂质代谢紊乱的敏感指针,因此在临床实践中,脂蛋白分离分析已成为常规检验指标。少量血清标本可以用电泳方法快速分离出各类脂蛋白,常用的支持介质有醋酸纤维素薄膜、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶。

超速离心法与电泳法分离血浆脂蛋白相应名称

图2-2 超速离心法与电泳法分离血浆脂蛋白相应名称

醋酸纤维素薄膜电泳:特点是微量、快速、操作简便、吸附少、分离效果较好,能分离出α、前β、β及乳糜微粒等四条区带,有的血清有两条前β带。缺点是前β脂蛋白含量过高时会有拖尾现象,此外染色方法也不够理想,醋酸纤维素薄膜本身能被脂溶性染料着色,用苏丹黑B染色后背景深染,油红O虽然好一些,但脂蛋白带着色较浅。如用臭氧氧化后,碱性品红-亚硫酸试剂染色,所得图形清楚,背景着色较浅,缺点是染色步骤较繁,白蛋白部位有时染色过深。

琼脂糖电泳:琼脂糖是琼脂的主要成分,琼脂经处理惯除去其中的果胶后即为琼糖,由于琼脂糖中的硫酸根含量较琼脂少,电渗较弱,透明度高,对脂蛋白的分离效果比醋酸纤维素薄膜更好一些,可将血浆脂蛋白分成α、前β、β-脂蛋白和乳糜微粒。若用脂溶性染料染色,背景色浅,如将血清样品进行预染,可在电泳过程中直接观察分离效果,区带整齐,分辨率高高,重复性好。液相与固相无明显分界,电泳速度较快,干膜还可长期保存。缺点是需要临时制作凝胶板,不如醋酸纤维素薄膜方便。

聚丙烯酰胺凝胶电泳:兼有电泳和分子筛的双重作用,分辨率高,电泳时间短,分离的各脂蛋白带十分清晰。由于聚丙烯酰胺凝胶具有分子筛的作用,能阻碍颗粒较大的前β-脂蛋白分子移动,所以前β-脂蛋白的区带落在脂蛋白的后面。

脂蛋白经上述三种电泳分离后,可用分段洗脱染料比色(不适用于圆盘电泳),或用光密度计扫描定量。以血清球蛋白迁移率作为参照,HDL与α球蛋白迁移在同一位置故称α-脂蛋白;LDL与β球蛋白迁移在同一位置,称为β-脂蛋白;VLDL区带迁移在β脂蛋白之前故称前β-脂蛋白;乳糜微粒留在原点样处不动。电泳技术是临床检验血清蛋白模式的有效手段,因此这种命名法常应用于临床检验,如图2-2所示。

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