二、酶法(GK-GPO-POD比色法)

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血清中甘油三酯经脂肪酶水解为甘油和脂肪酸,甘油在甘油激酶(GK)及ATP存在下,生成3-磷酸甘油,尔后,在磷酸甘油氧化酶(GPO)作用氧化成磷酸二羟丙酮并生成H2O2,H2O2与底物4-氨基安替比林和ESPAS在过氧化物酶(POD)作用下,生成红色亚醌化合物(quinoneimine),比色(500nm),其颜色深浅与甘油三酯含量成正比。

(一)手工测定法

1.试剂组成

代号种类浓度贮存2~8℃
R1磷酸甘油氧化酶≥3.0KU/L冷藏
(A液)抗坏血酸氧化酶≥1.0KU/L 
 甘油激酶≥0.7KU/L 
 4-氨基安替比林80mg/L 
R2脂蛋白脂酶≥2.0KU/L冷藏
 过氧化物酶≥10KU/L 
 ESPAS300mg/L 
R3(参考液)甘油酸三脂200mg/dl(2.26mmol/L)冷藏

*:一般采用商品试剂盒

血清甘油三酯测定法(酶法)操作图

图15-4 血清甘油三酯测定法(酶法)操作图

2.操作

按图15-4操作。

3.计算

血清TG浓度=ESA/EST×2.26(mmol/L)

(二)生化分析仪检测

全自动生化分析仪测定操作(以CL-7200型为例)。

1.试剂

A液:GK,GPO,4-AA-P、抗坏血酸氧化酶等。

B液:POD,Lipase,ESPAS等。

标准液:甘油三油酸酯 200mg/dl(2.26mmol/L)。

2.上机参数

名称参数
方法终点法
波长双波长(540nm 700nm)
试剂A反应时间2~3min
试剂B反应时间5~6min
反应温度37℃
样本用量4μl
试剂A用量200μl
试剂B用量100μl
单位mmol/L

3.操作过程

生化分析仪检测操作过程

4.计算

以△A=A2-A1并根据同样之标准或质控物计算,自动打印结果。

5.注意事项

①试剂与样本量可根据分析仪要求按比例改变。

②试剂在有效期内2~8℃避光保存。

③样本中甘油三酯含量超过11mmol/L需用生理盐水稀释后再测。

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