第二十四章　DNA的克隆与序列测定

近20年来分子克隆技术的发展突飞猛进，重组DNA操作技术包括的范围不断扩大，DNA克隆的方法亦多种多样，特别是PCR技术的应用，以及RFLP、SSCP等技术的开展，使得DNA克隆技术的应用日益广泛。

DNA克隆技术在动脉粥样硬化等疾病的病因及诊疗研究中也有重要的作用。例如在研究脂蛋白酯酶基因发生的特异突变时，可以设计合成扩增引物，进行模板DNA的PCR扩增，所得的PCR产物较小，仅有300多bp，且纯度不足以进测序。为了对此突变序列进行测序分析，就可以采用DNA克隆的方法，将此PCR产物连接到细菌质粒上，再进一步纯化后测序，以便鉴定脂蛋白酯酶的突变序列。

下面简要介绍DNA克隆和测序的常用方法。