首先将血清中胆固醇酯在胆固醇酯酶（CEH）水解为游离胆固醇和脂肪酸，胆固醇在胆固醇氧化酶（COD）作用下，生成△4-胆甾烯酮和H₂O₂，再H₂O₂经过氧化物酶（POD）作用在4-氨基安替比林（4-AA-P）及N-乙基-N-（3-磺基醋酸）-3甲氧基苯胺（N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-manisidine,ESPAS）参与下，生成红色醌亚胺色素。

H₂O₂+ESPAS+4-氨基安替比林→红色醌亚胺色素

（一）手工测定法

1．试剂组成

*混匀，调pH至6.70±0.10(25℃)，或购买试剂盒。酶以活性单位表示。

2．操作

按图15-2操作。

3．计算

标准总胆固醇浓度=E_SA/E_ST×5.17(mmol/L)

（二）自动化分析仪测定

以CL-7200型全自动生化分析仪检测为例。

1．试剂组成

A液：CEH、POD、抗坏血酸氧化酶等。

B液：COD、4-氨基安替比林等。

图15-2 血清胆固醇测定（酶法）操作图

2．上机参数

3．操作过程

4．计算

以△A=A2-A1，根据同样处理之标准或质控物计算，打印结果。

5．注意事项

（1）试剂与样本量可根据分析仪要求按比例改变。

（2）试剂在有效内2～8℃避光食保存。

（3）胆固醇含量超过200mmol/L，需用生理盐水稀释再测。