二、血清低密度脂蛋白测定

LDL是一组不均一的脂蛋白颗粒，其胆固醇含量约占总胆固醇的45%～50%。

测定血浆中LDL，首先同样要分离LDL，其分离方法有超速离心法、聚阴离子沉淀法、色谱法、电泳法及计算法等。以聚阴离子沉淀法简便易于操作，结果准确可靠。由于直接测定LDL有一定的困难，因为它是蛋白质脂类组成的颗状结构，胆固醇是其较为衡定的因素，因此采用测定LDL中所含的胆固醇的浓度作为LDL定量的依据。

另外，还可以通过用Friedwal公式计算，主要是利用血清TC、TG及HDL-C浓度测定结果，即LDL-C=TC-HDL-C-（1/5）TG。对脂代谢异常的高脂血症，不能按此方法计算结果。

（一）聚乙烯硫酸盐（PVS）法

1．原理

生成的醌亚胺与上清液的TC含量成正比。

2．试剂组成

（1）沉淀剂：聚乙烯硫酸钾盐0.7g/L、聚乙二醇独甲醚170g/L、乙二胺四乙酸5mmol/L，混匀，4～21℃避光可保存一年。

（2）酶法胆固醇测定试剂（同第15章）。

（3）胆固醇标准液：2.58mmol/L。

3．操作

（1）空腹12h，采静脉血，3h内分离完成血清以免脂蛋白之间相互交换和防止LDL降解。-70℃可以保存数月之久。

（2）取200μl血清置于含有沉淀剂100μl试管中充分混匀，室温放置15min,3000r/min离心，留上清测定胆固醇。

（3）按下表进行操作：

	空白管	测定管	标准管
上清液（μl）		30
定值血清（μl）			30
水（μl）	30
胆固醇酶试剂（μl）	2.0	2.0	2.0

混匀，37℃6min，以空白管调零（500nm），读取光密度。

（4）计算

血清LDL-C=TC-上清液胆固醇

（5）注意事项

标本沉淀过程严格按要求进行。吸取上清液时，注意轻吸，别搅动沉淀。

PVS法能将Lp（α）完全沉淀，一般情况下，正常人含量极少，一旦高脂血症、Lp（α）增高时，其测定值LDL-C应为LDL-C和Lp（α）-C之和。

（二）血清LDL-C直接测定法

1．原理

含反应活性剂的试剂Ⅰ加入血清后，与HDL、VLDL和CM反应，使其胆固醇水解并与酶反应生成无色产物溶于介质中。再加入含溶解LDL的活性剂Ⅱ试剂，使LDL水解并与其中的胆固醇试剂进行偶联反应生成红色化合物，定量血清中LDL-C。

以△A=A₂-A₁进行运算，测出LDL-C的含量

2．试剂（第一化学）

R1：去垢剂1、COD、POD、4-AAP。

R2：去垢剂2、DSBmT。

3．操作

按CL-7200型或其他型号全自动生化分析仪检测，有关参数如表16-2所示。

表16-2　LDL-C检测参数

名称	参数
分析方式	终点法
标本用量（μl）	[3]
R1体积（μl）	[300]
R2体积（μl）	[100]
第一试剂时间	5min
第二试剂时间	5min
波长（nm）	[560][600]

4．特点

（1）直接测定，无需预先处理。

（2）操作简便，减少影响准确性的因素。

（3）标本及试剂用量少，准确性高。

（4）抗干扰能力强，适合于自动化分析。

（5）该法CV为5%以下，回收率90%～110%，线性范围0～88mmol/L。

5．注意事项

待测血清标本于当日测试，2～8℃一周内保存，-20℃以下长期保存，结果均不受影响。