三、高密度脂蛋白亚组份胆固醇(HDL2-C,HDL3-C)检测

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聚乙二醇20000沉淀法

1.原理:

HDL中主要组份为HDL2和HDL3。用聚乙二醇20000(PEG20000)作沉淀剂,以不同浓度在不同pH条件下,可将HDL2和HDL3分离开。95g/L聚乙二醇20000在pH6.5环境下可将血清中低密度脂蛋白(LDL)和极低密度脂蛋白(VLDL)沉淀,离心后上清液中只含HDL。170g/L聚乙二醇20000在pH7.5环境中,可将LDL、VLDL、HDL2沉淀,离心后上清液中只含HDL3,以酶试剂侧定各自上清液中胆固醇含量,通过换算,计算出代表HDL各亚组分含量。

2.试剂:沉淀剂Ⅰ:95g/L PEG20000,pH6.5

沉淀剂Ⅱ:170g/LPEG20000,pH7.5。

胆固醇酶应用液及参考血清以试剂盒而定。

3.操作方法:(以生化分析仪为例)按表16-3操作

表16-3 HDL-C亚组分测定操作步骤

加入物1管2管
血清100100
沉淀剂Ⅰ(μl)200-
沉淀剂Ⅱ(μl)-200

置混匀器上混匀2min,置室温10min,3000r/min离心20min,上清液待测。

上清液于生化分析仪测定,测定参数参照总固醇测定法。

5.结果计算

HDL-C=上机测得结果×血清稀释倍数

HDL3-C=上机测得结果×血清稀释倍数

HDL2-C=HDL-C×HDL3

6.注意事项:

离心时间及速度一定要准确;

离心上清液混浊者应继续离心直到清亮止;

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