一、Abell-Kendall改良法
1.原理
血清加入醇溶性氢氧化钾,使胆固醇从脂蛋白中分离出来,同时使胆固醇酯加水分解成游离胆固醇,加石油醚振摇、抽提,使胆固醇移入石油醚层,分离并取一定量的石油醚层,蒸发至干,再进行Liebermann-Burchard 显色反应,620nm比色定量。该法可用于基本功训练及组织细胞胆固醇的提取定量。
2.试剂组成
代号 | 种类 | 浓度 | 组 成 | 贮存2~8℃ | 有效时间 |
R1 | 乙醇 | 优质纯 | |||
R2 | 石油醚 | 沸点68℃,特级纯 | |||
R3 | 水醋酸 | 分析纯 | |||
R4 | 无水醋酸 | 胆固醇分析用,不含HCI | |||
R5 | 浓硫酸 | 分析纯 | |||
R6 | KOH液 | 33%(W/W) | KOH10g+H2O20ml | ||
R7 | 乙醇性KOH液 | R194ml+R66ml | 临用前配制 | ||
R8 | Liebermann | 配制后 | |||
Burchard | R420体积+R51体积+R310体积 | 1h | |||
试剂* | 内用完 | ||||
R9 | 胆固醇标准液 | 5.17mmol/L | 胆固醇标准品200mg+R1→100ml | 0 |
*:在三角烧瓶内,加入无水醋酸,于冰水中冷至10℃以下,再慢慢加入浓硫酸,混合,静置10min,又加冰醋酸混匀,备用。
3.操作
图15-1 血清胆固醇(Abell法)测定操作图
按图15-1操作。
4.计算
标准总胆固醇浓度=ESA/EST×5.17(mmol/L)

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