四、硫酸右旋糖苷(DS)沉淀血清脂蛋白法
1.试剂
1%DS、10%DS、2mol/L CaCl2、1mol/L K2C2O4、12%NaCl、0.2mol/l Tris-HCl、0.9%NaCl、0.01mol/L EDTA(pH7.4)
2.操作
混合血清在3000r/min下,离心30min,除去血细胞及其他固体物质,再以2000r/min离心30min(4℃),以除去血清中的CM。
取一定体积的上述血清,加1%DS,使血清中的DS浓度为0.05%,加2mol/lCaCl2,使血清中CaCl2的终浓度为0.1mol/L,搅拌后放4℃冰箱过夜,于第二天离心(3750r/min)30min,将离心后的沉淀物溶解在12%NaCl中,而后加0.2mol/l Tris-HCl缓冲液250ml(pH7.4),离心10min,弃去上清,将所得沉淀用0.02mol/l Tris-HCl再洗一次,此步骤要重复3次。将最后得到的VLDL和LDL溶解在7.5~15ml的1mol/L草酸钾中(4℃),3750r/min离心30分钟,去掉沉淀,然后将此溶液在1%NaCl,1%BaCl2溶液中透析48h(4℃)。将透析过的溶液放于离心管中去掉沉淀。把上清液再放入0.02mol/l Tris-HCl缓冲液透析72h,离心,其上清则含有较纯的VLDL和LDL
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