四、粘连蛋白的提取
提取粘连蛋白的基本原理是用NaCl脱氧胆酸钠液提取血管壁中的粘连蛋白,再用高盐除去杂质,然后进一步用Sephacryl层析纯化,方法如下:
1.将动脉血管壁组织加10倍体积处理液(0.05mol/lTris-HCL pH7.6、0.5%核酸酶),4℃搅拌20min,10kr/min离心10min。
2.沉淀用含0.05mol/L Tris-HCl pH7.6、0.5%PMSF、10%甲醇液,洗涤2次,10kr/min离心10min。
3.沉淀物中,加40倍体积处理液(0.05mol/lTris-HCl pH7.6、0.5%PMSF、0.5mol/LNaCl,)4℃过夜后,10kr/min离心10min。
4.上清用PEG6000浓缩,最后加入已平衡好的SephacrylS-3000层析柱上,用0.05mol/L Tris-HCl pH7.6、0.5%NaCl洗脱,第一峰即为粘连蛋白。
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