三、微生物学诊断
(一)病毒分离
病人急性期血液、尸检组织或感染动物的肺、肾等组织均可用于病毒分离,组织需研磨成悬液。常用Vero-E6细胞分离培养,培养7~14天后,用免疫荧光染色法检查细胞内是否有病毒抗原,胞浆内出现黄绿色颗粒荧光为阳性。也可取检材接种易感动物来分离病毒,常用者为小白鼠乳鼠,通过腹腔或脑内接种,接种后逐日观察动物有无发病或死亡,并定期取动物脑、肺等组织,冰冻切片或将组织研磨成悬液后分别用免疫荧光法或ELISA检查是否有病毒抗原。用细胞或动物分离培养阴性者继续盲传,连续三代阴性者方能肯定为阳性。此外在进行动物实验时采取严格的隔离及防护措施,以防止发生实验室感染。
(二)血清学检查
1.检测特异性lgM 抗体:此抗体在发病后第1~2天即可检出,急性期阳性率可达95%以上,因此检测此抗体具有早期诊断价值。根据情况可选用间接免疫荧光法(IFAT)和ELISA,后者又可分为lgM捕捉法和间接法,其中以lgM捕捉法的敏感性和特异性为最好。
2.检测特异性lgG抗体:病后特异性lgg 抗体出现较早,维持时间很长,因此需检测双份血清(间隔至少一周),恢复期血清抗体滴度比急性期升高4倍以上可确诊。常用检测方法为IFAT和ELISA。此两种方法还可用于血清流行病学调查。
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