F（ab）2含量测定

1　试剂

1.1　丙烯酰胺溶液

取丙烯酰胺14g，双丙烯酰胺0.367g，加蒸馏水至50ml。

1.2　缓冲液

Ph7.2，0.2mol　/L　PB-0.2%SDS：取NaH2PO4·2H2O17.8g,Na2HPQ4·12H2O103g,SDS4g，加蒸馏水至2000ml。

1.3　样品结合液

取10%SDS4ml,0.2mol/L　PB0.2ml，甘油10ml，加蒸馏水至20ml。

1.4　电极缓冲液

取上述1.2项缓冲液稀释1倍。

1.5　固定液

取甲醇400ml，冰醋酸70ml，加蒸馏水至1000ml。

1.6　染色液

取考马斯亮蓝2.5g，溶于500ml甲醇中，加冰醋酸70ml，再加蒸馏水至1000ml。

1.7　脱色液

取冰醋酸70ml，甲醇50ml，加蒸馏水至1000ml。

1.8　干燥液

取甘油30ml，甲醇200ml，加蒸馏水至1000ml。

2　操作

2.1　样品处理

取一定蛋白质浓度的样品0.1ml，加样品结合液0.1ml，100℃翥沸1～2分钟，或37℃2小时，冷却。

2.2　凝胶板制备

按下列比例制备所需量凝胶溶液∶0.2mol　/L　PB∶丙烯酰胺溶液∶水∶1.5%过硫酸铵=2∶1∶0.8∶0.25。最后加1～2滴四甲基乙二胺（TEMED），混匀后立即将胶液加入电泳槽的玻璃板间，要避免产生气泡。

2.3　加样

于每一样品孔内加入已经处理过的样品25μg蛋白。

2.4　电泳

电泳条件为每个样品孔的电流恒定为2～3mA。当溴酚蓝电泳至底部时停止电泳。

2.5　固定

将电泳后的胶板放入固定液中，过夜。

2.6　染色及脱色

于染色液中染色1～2小时，然后置脱色液中进行脱色，直至底色成为无色为止。

2.7　干燥保存

用适宜方法干燥。

3　结果计算

将干燥前或后的胶板用扫描仪于575nm或520nm处对每一样品进行扫描，得出（或计算出）样品中F（ab）2的百分含量。