附录2 百日咳菌苗原液免疫力试验方法

闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间礁纾瑰瀣捣閻棗銆掑锝呬壕濡ょ姷鍋為悧鐘汇€侀弴銏犵厱婵﹩鍘介妵婵嗏攽闄囬崺鏍ь嚗閸曨厸鍋撻敐搴濈胺婵″弶鍔欏缁樼瑹閳ь剙岣胯婢ф繈姊洪崫鍕櫤闁烩晩鍨堕獮蹇涘箣閿旇棄浜滈柣蹇撶箣閻掞箓寮埀顒勬⒒娴h櫣甯涢柨姘扁偓娈垮枦閸╂牕顕ラ崟顖氱妞ゆ牗绋撻崢鎼佹⒑閸涘﹦鐭嗙紒鈧担瑙勬珷妞ゆ牜鍋為悡娆忋€掑顒備虎濠碘€炽偢閹藉爼鏁愰崶鈺冿紲闁诲函缍嗘禍鐐寸閵忕姭鏀芥い鏃傗拡濡偓濠殿喖锕ㄥ▍锝囧垝濞嗗繆鏋庨柟顖嗗啫顥庨梻鍌欑濠€閬嶅箠閹捐秮娲敇閵忊€充粧濡炪倖娲嶉崑鎾垛偓瑙勬礀閻栧ジ銆佸Δ浣哥窞閻庯綆鍋呴悵鏇㈡⒒閸屾瑧鍔嶉柟顔肩埣瀹曟洖饪伴崼婵堫槰濡炪倕绻愬Λ娆忊枔閹间焦鈷掗柛灞捐壘閳ь剚鎮傚畷鎰槹鎼达絿鐒兼繛鎾村焹閸嬫挻顨ラ悙宸█闁轰焦鎹囬幃鈺呭礃闊厾缍嶉梻鍌欒兌缁垶宕濋幒鏃€濯伴柨鏇炲€搁弸渚€鎮楅敐搴″闁哥姵鍔欓弻锟犲礃閵娧冾暫缂備胶濮甸悧鐘诲蓟濞戞粠妲煎銈冨妼閹虫劖绔熼弴鐔洪檮闁告稑锕﹂崢浠嬫⒑瑜版帒浜伴柛銊ゅ嵆閹啴鎮滃Ο闀愮盎闁挎粌顭峰畷銊╊敍濠婃劗闂繝鐢靛仩閹活亞寰婇崸妤€绠犻柟鎯х摠閸欏繘鏌ㄩ弮鈧崹婵堟崲閸℃稒鐓曟繛鍡楁禋濡牓鏌涢弮鈧敮鈥愁潖婵犳艾纾兼慨姗嗗厴閸嬫挻顦版惔銏╁仺濠殿喗锕╅崗妤冪磽濮樿鲸鍠愮€广儱鐗忔禍閬嶆⒒娴e憡璐¢柧蹇撻叄瀹曚即寮介銈勭瑝濡炪倖鐗滈崑鐐烘偂閵夆晜鐓熼柡鍥╁仜閳ь剙婀遍埀顒佺啲閹凤拷2021-04闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间礁纾归柣鎴eГ閸ゅ嫰鏌涢幘鑼槮闁搞劍绻冮妵鍕冀椤愵澀鏉梺閫炲苯澧柛鐔告尦閻涱噣宕堕鈧痪褔鎮规笟顖滃帥闁哥偟鏁诲缁樻媴閼恒儳銆婇梺闈╃秶缁犳捇鐛箛娑欐櫢闁跨噦鎷� 闂傚倸鍊搁崐鎼佸磹閹间礁纾归柣鎴eГ閸ゅ嫰鏌ら崫銉︽毄濞寸姵姘ㄧ槐鎾诲磼濞嗘帒鍘$紓渚囧櫘閸ㄨ泛鐣峰┑鍠棃宕橀妸銉т喊闂備礁鎼崯顐︽偋婵犲洤纾瑰┑鐘崇閻撱垺淇婇娆掝劅婵″弶鎮傞弻锝嗘償椤旂厧绫嶅┑顔硷龚濞咃絿鍒掑▎鎾崇閹兼番鍨虹€氬磭绱撻崒娆戭槮妞ゆ垵妫濋獮鎴﹀炊椤掆偓閺勩儵鏌曡箛瀣偓鏇犵尵瀹ュ鐓曟い鎰╁€曢弸搴ㄦ煃瑜滈崜娑㈠极婵犳艾钃熼柕濞垮劗閺€浠嬫煕閳╁啩绶遍柍褜鍓氶〃鍡涖€冮妷鈺傚€烽柟纰卞幗閻h偐绱撴担浠嬪摵閻㈩垱顨堢划顓㈡偄閸濄儳鐦堥梺鍛婂姦閻撳牊瀵奸敓锟� >>>
《中国生物制品规程》书籍目录

1 免疫

1.1 动物

选用体重10~12g同性或雌雄性各半的健康NIH小白鼠。

将动物随机分为三组,每组16只或20只(同性或雌雄性各半,为保证攻击后有16只或20只小白鼠,可适当多免疫几只小白鼠),同时饲养健康小白鼠55只,备做对照用。

1.2 免疫原稀释

百日咳原液用生理盐水或pH7.3±0.1磷酸盐缓冲生理盐水稀释至成品菌苗浓度的1/2,然后再稀释7.5×、37.5×、187.5×,百日咳参考菌苗稀释至每ml含8IU,然后再稀释成每ml含1.0IU(0.125ml)、0.2IU(0.025ml)及0.04IU(0.005ml)。

1.3 免疫方法

将不同稀释度的免疫原分别免疫小白鼠,每只小白鼠各腹腔注射0.5ml。

2 攻击菌及攻击菌液的制备

2.1 菌种

小白鼠脑内攻击用58030(18323)菌株。

2.2 培养基

可用包-姜氏培养基(含羊血20%~30%)或其他适宜的培养基。

2.3 培养温度及时间

放35~37℃培育,第一代不超过72小时,攻击时菌种的培育时间为20~24小时。原代菌种放2~8℃可保存2周。

2.4攻击菌液的制备

将培育20~24小时的菌苔经肉眼检查为纯菌后,刮入生理盐水或pH7.3±0.1缓冲生理盐水,用灭菌脱脂棉过滤,测定浓度,然后用pH7.0~7.2水解酷素、蛋白胨水或肉汤稀释成每0.03ml含菌8万,作为试验组的攻击菌液,然后再连续稀释,使每0.03ml分别含8000、800、80及8个菌,以上5个不同稀释度的菌液,作为对照组的攻击菌液。

2.5 工作起止时间

自攻击菌液制备(开始刮菌)至注射完最后1只小白鼠不得超过2.5小时。

2.6活菌计数

在攻击前后,可将0.03ml含8个菌的攻击菌液,接种于包一姜氏培养基或其他适宜的培养基平皿中,每个平皿0.2ml,每次不得少于2个平皿,其菌落形成单位约为浊度测定的1/4。

3 攻击

动物免疫后14天,每只小白鼠脑内攻击0.03ml菌液(含8万个菌),用0.25ml注射器,4号针头。在试验组攻击后再进行对照组毒力测定,对照组每稀释度攻击10只小白鼠。

4 记录结果

动物攻击后观察14天。攻击后第2天,将试验组动物处理成每组16只或20只。以后逐日观察动物并记录死亡数,最初3天死亡的动物不作统计,至第14天有麻痹、头部肿胀、弓背及明显耸毛的动物按死亡计算。

5 结果计算

5.1 按Wilson-Worcester氏法计算参考菌苗及待检菌苗的ED50±SD%,每个ED50标准差的范围一般应为64%~156%。

5.2 按Reed-Muench氏法计算对照组LD50,1个LD50的菌数应不高于800个菌。

5.3 计算均质性因子“α”。

5.4IU计算

待检原液每ml应含IU=参考菌苗ED50/待检原液ED50×参考菌苗每ml的IU数

6 效力评价

百日咳原液按成品菌苗尝试稀释后,每个接种剂量的免疫效价应不少于4.0IU。

1000余本中医古籍txt电子书免费下载

下载《中国生物制品规程》 电子书打不开?

下载所有中医书籍

992 638 774 281 1256

返回《中国生物制品规程》书籍目录
  1. 百日咳菌苗原液免疫力试验方法《中国生物制品规程》
  2. 百日咳菌苗原液毒性试验方法《中国生物制品规程》
  3. 百日咳菌苗原液制造及检定要求《中国生物制品规程》
  4. 百日咳杆菌《医学微生物学》
  5. 百日内发搐《冯氏锦囊秘录》
  6. 百日咳(顿咳)《小儿常见病单验方》
  7. 百日内发搐《小儿药证直诀》
  8. 百日咳《传染病》
  9. 百日内嗽《中医词典》
  10. 百日咳《中医词典》
  11. 百日内嗽《幼科释谜》
  12. 百日咳《手穴手纹诊治》
  13. 百乳草《证类本草》
  14. 百日咳《中医名词词典》
  15. 百舌鸟《医学入门》
  16. 百日咳《家庭医学百科-医疗康复篇》
  17. 百舌鸟《证类本草》
  18. 百日咳《默克家庭诊疗手册》
  19. 百舌鸟窠中土《证类本草》
  20. 百日还丹《儒门事亲》
  21. 百生方《中藏经》
  22. 百日儿疟《中医词典》
  23. 百声娇《毓麟验方》
  24. 百日疮《中医词典》
  25. 百嗽《医述》
  26. 百内嗽第五十五问《婴童百问》
  27. 百嗽论《幼幼集成》
  28. 百内嗽《保婴撮要》
  29. 百脺嗽《中医名词词典》
  30. 百内嗽《证治准绳·幼科》
  31. 百台《冯氏锦囊秘录》

《中国生物制品规程》