人血白蛋白多聚体含量及人血丙种球蛋白中lgG各组份测定（高压液相凝胶柱色谱法）

1　仪器

1.1　高压液相泵

1.2　高压液相色谱柱：TSKG3000SW(直径7.5mm,长60cm)。TSk　Guard　Column　SW（直径7.5mm，长7.5cm）。

2　试剂

2.1　贮存液A：0.5mol　/L　NaH2PO4,pH4.8

称39g　NaH2PQ4·2H2O，用超纯水溶解，并稀释至500ml。

2.2　贮存液B：0.5mol　/L　Na2HPO4

称179.1g　Na2HPO4·12H2O，用超纯水溶解，并稀释至1000ml。

2.3　工作液C：0.2mol　/L　磷酸盐缓冲液，Ph7.0（含1%异丙醇）

准确量取200ml贮存液A、420ml贮存液B、914.5ml超纯水、15.5ml异丙醇，混匀，用0.45μm水溶性膜过滤并超声脱气。

3　样品处理

用生理盐水将样品稀释至4mg/ml，然后用0.45μm水溶性膜过滤。

4　操作

用工作液C以0.6ml/分钟流速平衡高压液相系统至基线平稳。取处理过的样品25μl上柱，用工作液C以0.6ml/分钟流速洗脱，同时在紫外检测器280nm波长下记录色谱图及有关数据。记录数据的时间为60分钟。

5　计算

5.1　人血白蛋白多聚体含量计算

用高压液相系统的色谱工作站或积分仪对试验结果进行数据处理，算出多聚体相对面积百分含量。再根据转化公式换算成相对重量百分含量。

转化公式*X（%）=Y－1.6504/1.6359

其中X为凯氏定氮结果，Y为高压液相结果（如Y值小于1.6504，结果不用转化成重量百分含量，但在试验报告中需注明为相对面积百分含量）。

5.2　人血丙种球蛋白中IgG各组份相对含量计算。

5.2.1IgG各组份峰的划界。

图谱中各峰的界限为两峰间最低点到基线的垂直线。

5.2.2IgG各组份相对含量计算。

用高压液相系统的色谱工作站或积分仪对试验结果进行数据处理，算出各组份相对百分含量。

*应根据各单位使用的HPLC仪器及层析柱型号，经试验后得出转化公式。