人血白蛋白中辛酸钠含量测定（气相色谱法）

1　试剂

1.1　氯仿（A.R）

1.2　辛酸（CP）标准液

用氯仿配成10mg/ml溶液。

1.3　庚酸（CP）内示液

用氯仿酸成10mg/ml溶液。

1.41.5mol/L高氯酸溶液

2　仪器

2.1　带有积分仪及氢火焰检测器的气相色谱仪。

2.2　色谱柱

色谱柱为内径3mm，长2m的玻璃柱，内装涂有10%聚乙二醇（20M）固定液的ChromsorbVV担体。

2.3　仪器工作条件

气化室温度230℃，柱温190℃，载气（纯氮）流速40ml/分钟；样品，标准液注入量为2μl。

2.4　振荡器

3　操作

3.1　标准曲线的绘制

取1.2项的辛酸标准液各10、20、30、40及50μl，分别与30μl.3项的庚酸内标液和4ml的氯仿组成5个标准管，混合均匀后，在通风橱中将氯仿挥发至干，然后定量加入0.1ml氯仿溶解残渣，上机测定。典型的色谱图中内标庚酸的保留值为9分钟左右，辛酸的保留值为13分钟左右。分别以自动积分仪显示的各管样品的辛酸和内标庚酸的峰面积之比，对各管中所含辛酸加入量进行回归统计，也可得到回归方程。

3.2　样品测定步骤

取已知蛋白浓度样品，用蒸馏水稀释至5%蛋白浓度，然后准确取0.5ml，加入庚酸内标液30μl，1.5mol　/L高氯酸0.2ml，在振荡器上混合均匀，然后加入氯仿4ml，加盖，用振荡器剧烈混合1分钟，2800r/min离心10分钟。用滤纸卷条小心吸去上层水，再用吸管小心吸出氯仿层，移入10ml管子中，在通风橱中待氯仿挥发至干，精确加入0.1ml氯仿，溶解残渣，上机测定。

4　计算

4.1　根据样品测定时所得的辛酸与内标庚酸的峰面积比代入已得回归方程，即得辛酸绝对含量。

白蛋白中辛酸量（mmol　/g蛋白）=测得辛酸绝对量（μg）/144.22×0.5×样品蛋白浓度×100

注：

1.辛酸量（mmol）相等于辛酸钠量（mmol）。

2.辛酸分子量为144.22。