磷含量测定

1　试剂

1.1　高氯酸。

1.2　浓硫酸。

1.3　30%过氧化氢。

1.40.04mol　/L　钼酸铵

取钼酸铵5g，加蒸馏水溶解成100ml。

1.5　还原剂

称取亚硫酸氢钠6g，亚硫酸钠1.2g，1-氨基-2-茶酚磺酸0.1g，加蒸馏水溶解成50ml，置棕色瓶中保存，一周内可用。

1.6　磷标准液

精确称取已干燥至恒重的磷酸二氢钾439.3mg，加蒸馏水溶解，移入100ml容量瓶中，稀释至刻度，为贮备液（1mg磷/ml）。精确量取贮备液2ml，于100ml容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，为磷标准液（20μg/ml）。

2　操作

2.1　样品

A群脑膜炎球菌多糖菌苗成品测磷至少取三支安瓿溶解后混合使用。

精确量取一定体积样品（含磷4～20μg）于刻度试管中，加4滴浓硫酸（约0.08ml），加热至炭化，再加2滴高氯酸（约0.06ml），消化至无色澄清，必要时可加1～2滴30%过氧化氢，但最后必须将过氧化氢除尽。消化后稍置片刻，趁热另2ml蒸馏水（如冷却后加水，需再加热），加0.4ml0.04mol　/L　钼酸铵，混匀，加0.2ml还原剂，混匀，另蒸馏水至6ml，15～20分钟后，于820nm波长比色。

2.2　标准曲线

精确量取磷标准液（20μg　/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于刻度试管中，补加蒸馏水至1ml，其余操作同样品，可得一标准曲线。

3　计算

从标准曲线查出样品相当标准液之ml数A。

样品磷含量（μg　/ml）=A×20/样品ml数

核酸含量测定

取含A群脑膜炎多糖抗原5±1mg　/ml溶液，采用紫外分光法于260nm波长测定OD值，按E1%1cm=200计算核酸含量。