1　试剂

1.1　盐酸（1∶9）

10ml浓盐酸加90ml蒸馏水。

1.2　0.2%铝试剂溶液

0.2g铝试剂加100ml蒸馏水溶解。

1.3　10%醋酸铵溶液

称取10g醋酸铵（AR），加蒸馏水溶解并稀释至100ml。

1.4　准铝溶液（10μg铝/ml）

精密称取明矾[KAl（SO4）2·12H2O]（AR，无风化）0.3518g，加1.5mol/l　HCl8ml，加蒸馏水到500ml，为40μg铝/ml的标准浓溶液。临用时精确量取2.5ml标准铝浓溶液于10ml容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，为10μg铝/ml标准液。

1.5　4mol　/L　NaOH溶液

称取40g　NaOH(A.R)，加蒸馏水溶解并稀释至250ml。

1.60.5mol　/L　NaOH溶液

取50ml　4mol　/L　NaOH加蒸馏水至400ml。

1.70.1mol　/L　HCl溶液

1ml浓HCl（A.R）加蒸馏水至120ml。

取溴麝香草酚蓝0.1g,加0.05mol/L　NaOH3.2ml,溶解，再加水衡稀释至200m。

2　操作

2.1样品

精密量取1ml样品于凯氏消化瓶内，加1ml浓H2SO4于电炉上消化。从浓的白烟生成到白烟基本消除，再继续消化15分钟，稍冷，向消化瓶中另入适量H2O2，于电炉上继续消化至无气泡生成，消化液呈无色透明。待冷后，用4mol/LNaOH中和消化液（10%白蛋白加5ml4mol/LNaOH）。然后将消化液转移至10ml容量瓶中，并用蒸馏水稀释至刻度。

取2ml稀释液于25ml带塞比色管中（取2管）。另取2ml稀释液于50ml三角烧瓶中，向三解烧瓶中加2滴BTB指示剂，如变蓝，用0.1mol/LHCl滴定至黄绿色；如为黄色就用0.5mol/LNaOH滴定至黄绿色或浅蓝色。用此方法将2ml样品或对照稀释液的pH值调至5.5~8.5，按此量将比色管内的稀释液pH值调至5.5~8.5。加1mlHCl(1∶9)，加蒸馏水使其总体积不超过17ml，加0.2%铝试剂1ml、10%醋酸铵溶液5ml，加蒸馏水至25ml。加塞摇匀。放置20分钟后，用530nm波长测其吸收度（OD值）。同时做空白对照，用1ml蒸馏水代替1ml样品，其余操作同样品。

2.2　标准曲线

精密量取标准铝溶液（10μg铝/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml于25ml带塞比色管中，铝含量分别为0、2、4、6、8、10μg，从加1mlHCl（1∶9）起同样品管。

3　计算

3.1　由标准曲线查出，或从标准计算出的直线回归方程中求出对照管和样品管的铝含量（A）。

3.2　根据中和用去的碱量计算出2ml样品和对照稀释液中含4mol/LNaOH的ml数。

3.3　根据2ml对照稀释液含的4mol/l　NaOH量和含铝量，计算出每ml4mol/l　NaOH含铝量。

3.4　根据每ml4mol/l　NaOH含铝量和2ml样品稀释液中含4mol/l　NaOH的ml数，计算出2ml样品稀释液中，中和用的4mol/l　NaOH含铝量（B）。

3.5　计算样品中含铝量

样品中含铝量（μg/g蛋白）=[（A－B）÷2×10]÷蛋白含量（g/ml）

附注

1．铝试剂不仅能与某些金属离子形成有色的络合物，同时也会由于溶液中H+浓度的改变而产生颜色的变化。因此测定时，要严格控制溶液的pH值在5.0左右，样品和标准的pH值一致。

2．铝试剂避光保存。