六、PCR实验中常见问题对策
所有实验结果都有成功或失败，实验的失败可能是应该出结果而没有出，我们把它称作假阴性，不该出结果而出了结果我们把它称为假阳性。PCR实验中最常见的问题就是假阴性和假阳性问题。
（一）假阴性：出现假阴性结果最常见的原因是：Taq DNA聚合酶活力不够，或活性受到抑制；引物设计不合理；提取的模板质量或数量不过关以及PCR系统欠妥当；循环次数不够。所以在实验中出现假阴性失败时，首先在原来扩增的产物中再加入Taq DNA聚合酶、增加5-10次循环，一般都会获得成功。如果没有成功应检查PCR扩增仪的温度是否准确，采集标本是否有问题。为了防止假阴性的出现在选用Taq DNA聚合酶时，要注意用活力高质量好的酶。同时在提取PCR模板时，应特别注意防止污染抑制酶活性物质（如酚、氯仿）的存在。尽管Taq DNA聚合酶对模板纯度要求不高，但也不允许有破坏性有机试剂的污染。PCR扩增的先决条件及特异性是引物与靶DNA良好的互补，尤其是要绝对保证引物的3′端与靶基因的互补。对变异较大的扩增对象，宜采用巢式（Nested）PCR或double PCR。在进行PCR操作时应注意Mg2+的浓度要合理。PCR反应的各温度点的设置要合理。
（二）假阳性：PCR结果的假阳性是对被检测标本而言，而反应系统中所扩增的产物是真实的。因为PCR技术高度灵敏，极其微量的靶基因污染都会造成大量扩增，而造成结果判断上的失误，所以污染是PCR假阳性的主要根源。PCR的污染主要是标本间的交叉污染和扩增子的污染。出现假阳性结果的另一种可能是样品中存在有靶基因的同源序列。为了避免因污染而造成的假阳性，PCR操作时要隔离不同操作区、分装试剂、简化操作程序，使用一次性吸头。
- PCR实验中常见问题对策《基因诊断与性传播疾病》
- PCR扩增产物的分析法《基因诊断与性传播疾病》
- PCR仪器的发展《实用免疫细胞与核酸》
- PCR介导的信号转导途径《细胞和分子免疫学》
- PCR应用领域《实用免疫细胞与核酸》
- PCR技术的原理《实用免疫细胞与核酸》
- PCR应用特点《实用免疫细胞与核酸》
- PCR缓冲液《实用免疫细胞与核酸》
- PCR与原位杂交细胞化学结合法《实用免疫细胞与核酸》
- PCR方法《基因诊断与性传播疾病》
- PE、社会药学与医院药学的关系《医院药学》
- PCR反应的基本条件及其对PCR的影响《基因诊断与性传播疾病》
- PEEP和CPAP的应用《急诊医学》
- PCR法《生物化学与分子生物学》
- PE-标记蛋白A方法《实用免疫细胞与核酸》
- PCR的特点《基因诊断与性传播疾病》
- PG《生物化学与分子生物学》
- PCR的基本原理和基本程序《基因诊断与性传播疾病》
- PG、TX及LT的生理功能《生物化学与分子生物学》
- PCR操作范例《实用免疫细胞与核酸》
- pH对反应速度的影响《生物化学与分子生物学》
- PCR标本的制备《基因诊断与性传播疾病》
- pH梯度法《胃肠动力检查手册》
- PCR-SSCP分析技术《实用免疫细胞与核酸》
- PH值测定（电位法）《中国生物制品规程》
- PCO2、H+和PO2在影响呼吸中的相互作用《生理学》
- PH值与缓冲溶液《医用化学》
- Parry-Romberg氏综合征《神经精神疾病诊断学》
- PH值在医学上的应用《医用化学》
- Parinaud氏综合征《神经精神疾病诊断学》
- PKC的亚类及其结构特点《细胞和分子免疫学》
《基因诊断与性传播疾病》
- 总论
- 各论
- 第三章 淋病
- 第四章 梅毒
- 第五章 非淋菌性泌尿生殖道炎
- 第六章 艾滋病（AIDS）
- 第七章 尖锐湿疣
- 第八章 生殖器疱疹
- 第九章 巨细胞病毒感染症
- 第十章 软下疳
- 第十一章 性病性淋巴肉芽肿
- 第十二章 腹股沟肉芽肿
- 第十三章 生殖器念珠菌病
- 第十四章 细菌性阴道病
- 第十五章 阴道毛滴虫病
- 第十六章 疥疮
- 第十七章 阴虱病
