第三节　免疫金银染色

免疫金银染色（immunogoldsilverstaining，IGSS）是在金免疫技术基础上发展起来的更为敏感的技术，由Holgate在1983年首先建立成功。

一、原理

金免疫技术测定的产物上的金颗粒可将银离子还原成银颗粒，在金颗粒表面形成一色泽更深的黑色层，因而增强了金免疫技术的敏感性（图19-3）。

图19-3 免疫金银染色原理示意图

二、方法

IGSS的主要试剂为银染液。以往一般用硝酸银染液，但其对光的稳定性较差；改用乙酸银溶液后稳定性加强，配方如下：

A液：0.22％乙酸银溶液（乙酸银110mg溶于去离子水50ml中）。

B液：50％阿拉伯树胶溶液（阿拉伯树胶50g溶于去离子水100ml中，每天振摇3次，5天后过滤使用）。

C液：1％对苯二酚溶液（对苯二酚500mg溶于0.55mol/LpH3.8的柠檬酸盐缓冲液50ml中）。

D液：在C液中加入B液10～40ml。

使用前将A液和D液等量混合，即为银染液。

IGSS多用于组织化学检测。对于以膜为载体的免疫学试验，金染色后的银加强可按下法进行：将膜用0.05mol/LpH8.2TBS浸洗3次，每次3min，用去离子水冲洗一次，浸入0.05mol/LpH3.8柠檬酸缓冲液平衡5min，浸入银染液中，37℃25min。将膜取出，用去离子水冲洗，放入定影液1min，去离子水冲洗，空气干燥。

三、应用

金免疫技术的敏感度低于其它标记免疫技术，经银加强染色后敏感度可与荧光免疫技术和酶免疫技术相当。因此近年来发展了不少IGSS方法以替代荧光免疫技术，可以在普通显微镜下进行检测。

在以膜为载体的免疫技术（如免疫印迹法）中，也有应用IGSS以替代酶免疫法。也有用金标记抗体代替酶标记抗体进行类似ELISA的测定，最后进行银加强，其敏感度与ELISA相仿。