二十三、药品的溶血试验、局部剌激及过敏试验

一、溶血试验法

本法系将一定量的供试品加到2%兔血生理盐水混悬液中观察有无溶血和凝集现象，作为中药注射剂安全检查项目之一。

（一）2%兔血生理盐水混悬液的配制 从健康家兔耳静脉或心脏取血2ml，加生理盐水稀释至100ml摇匀即得。

（二）供试品衡释液的配制甲液取供试品溶液0.5ml，加生理盐水稀释至100ml，摇匀即得。

乙液 取供静脉注射的供试品溶液1.0ml，加生理盐水稀释至10ml，摇匀即得。

（三）试验方法 取干净试管3支，按下列顺序加入各种溶液，各管摇匀，置37℃恒温水浴中静置观察1小时。

结果判断 1小时后取出各管观察，第一管如出现红色澄清液，则为血阳性，不宜供注射用。第1管或第2管如出现红细胞凝集，经摇匀后红细胞仍不均匀散开或出现药物性沉淀，则为凝集阳性，都不宜供静脉注射用。第3管对照组应无溶血及凝集现象发生。

二、局部剌激试验法

家兔股四头肌法 本法系将一定量的供试品注射家兔股四头肌内，在规定时间内，部开肌肉观察供试品对局部肌肉剌激反应的情况，以判断供试品的局部剌激试验是否符合规定。

试验方法 取健康无伤、体重在2.0kg以上的家兔（雌雄均匀）2只，分别在后左、右两腿肥肉四头肌内各注入药品1ml，48小时后处死动物，取出股四头肌，纵向剖开，观察局部剌激反应。并按下表记录相的剌激强度，然后算出4块股四头肌反应级的总和。如各肥股四头反应的最高与最低级之差大于2时，应另取2只家兔复试，方法同上。

剌激强度与剌激反应对照表

结果判断

（一）在初度或复试的2只家兔4块股四头肌剌激强度的反应级之和，或在10以下老帅是认为样品的局部剌激试验符合规定。试验注意事项在对家兔进行注意前，应用知觉方法使家兔固定，注射时要防止动物躁动或注射针头晃动，造成非药物性损伤，影响判断结果。

（二）家免点眼法取家兔5只，左眼点药，右眼对照，将供试液和生理盐水各2滴分别滴入左右眼结膜襄内，观察至数小时后（对有剌激的药液，则应观察到作用完全消失，结膜完全恢复正常），角膜有无红肿、充血、流泪以及能否恢复等。

三、过敏点眼法

本法系指在试验条件下，检查供试品是否会引起的过敏的一种方法。

（一）试验方法：取体重250-350g健康豚鼠6只，每只鼠隔日腹腔注射供试品0.5ml，共注射3次。然后分为2组，每组3只，分别于第1次注射后14日及21日再静脉注射供试品1ml，观察豚鼠在注射后15分钟内有否明显的竖毛、兴奋不安、呼吸困难、连续咳嗽、紫绀、呼吸困难、虚脱及窒息死亡等现象。

过敏反应症状与级别划分对照表

（二）结果判断反应级别为＋、＋＋、＋＋＋时，则供试品过敏性试验认为不合格。当反应级别为0，±时，则该供试品过敏试验认为合格。

（三）试验注意事项

1．如供试品为中药注射剂，则取供试品或中间体药液与氧化免凝胶按1：1混合后，于每只豚鼠两侧腋下分别皮下各注射0.5ml作致敏注射。然后于14日及21日各取致敏豚鼠3只，静脉注射供试品2ml，进行攻南击，观察豚鼠反应。

2．致敏注射时，应按无菌操作。