一、粘性末端连接
如果目的序列两端有与载体上相同的限制性核酸内切酶位点,则同一限制酶切开产生的粘末端,在降低温度退火时,能重新互补结合,在DNA连接酶催化下,目的序列就与载体DNA链相连接(见图20-5)。
图20-5 同一限制酶切割DNA粘性末端的连接
不同的限制性内切酶切,如果产生的DNA的粘末端相同,也同样可用此法连接,如识别6bp序列的BamHⅠ和识别4bp序列的Sau3aⅠ切割DNA后都产生5’突出粘性末端GATC,可以互补结合连接。
如果在连接的两个DNA片段没有能互补的粘性末端,可用末湍核苷酸转移酶催化脱氨单核苷酸添加DNA的3’末端,例如一般DNA3’端加上polyG,另一股DNA加上polyC,这样人工在DNA两端做出能互补的共核苷酸多聚物粘性末端,退炎后能结合连接(图20-6),这样方法称为同聚物加尾法。
图20-6 同聚物加尾连拉法
对平末端的DNA,也可先连上人工设计合成的脱氧寡核苷酸双链接头,使DNA末端产生新的限制内切酶位点,经内切酶割后,即可按粘性末端相连(图20-7)。
图20-7 人工接头连接法
- 粘性末端连接《生物化学与分子生物学》
- 粘膝《中医词典》
- 粘液瘤《默克家庭诊疗手册》
- 粘膜皱襞的改变《放射诊断学》
- 粘液囊肿《口腔科学》
- 粘膜下层《组织学与胚胎学》
- 粘液性水肿昏迷《急诊医学》
- 粘膜对紫外线照射的反应《理疗学》
- 詹糖香《证类本草》
- 粘膜白斑病《理疗学》
- 詹糖香《增广和剂局方药性总论》
- 粘膜白斑《老年百病防治》
- 詹文升《中医词典》
- 粘膜《组织学与胚胎学》
- 谵妄《默克家庭诊疗手册》
- 粘连性中耳炎《耳鼻咽喉外科学》
- 谵妄《中医名词词典》
- 粘连性肠梗阻《普通外科学》
- 谵妄《中医词典》
- 粘连蛋白的提取《动脉粥样硬化》
- 谵妄《麻疹备要方论》
- 粘合素超家族《医学免疫学》
- 谵妄《麻疹阐注》
- 粘合素超家族《细胞和分子免疫学》
- 谵妄《医学纲目》
- 粘汗《中医词典》
- 谵妄《医宗金鉴》
- 粘附剂《实用免疫细胞与核酸》
- 谵妄《冯氏锦囊秘录》
- 粘附分子与肿瘤《细胞和分子免疫学》
- 谵妄《续名医类案》