一、方法建立的原理确定

临床生化方法按其传统分类可分为光谱法、层析法、电泳法、酶法、电化学法、分子生物学和免疫化学法等，这些方法的建立首先要根据其技术的原理（详见前面有关章节）和被测物质的物理化学性质来确定其方法建立的原理，例如亮度法测定的对象是各种有色物质，有色物质溶液的颜色深浅与其浓度有一定的关系，浓度大时色深，浓度小时色浅，比较颜色的深浅即可测知待测物质的浓度。为此，首先要知道待测物质本身是否有色，若本身无色，能与何种物质在什么条件下呈色，弄清后即可与一已知浓度的标准品作比较，然后分别测出两者的吸亮度，从郎伯-比耳定律可得知：

由于分析的物质相同，处理也一样，故K值相同，再因为测定时用同样比色皿（L₁＝L₂），所以光度法中测得未知液与标准液吸光度的比值就等于其浓度的比值。（A₁/A₂＝C₁/C₂）。如C₁为未知物浓度，则可得到计算公式如下：

C₁＝A₁×C₂/A₂

只要再乘以测定时标本的稀释倍数，即为通常光度法测定的通用的计算公式，但此公式只有在测定时空白管为零的条件下才适用。