一、抗独特抗体的制备

（一）抗原及其用量的选择

由于Ab2是针对Ab2Id的抗体，因而制备Ab2时应选择适当的Ab1作为免疫原。所用抗原的用量依照给予抗原的种类、次数、途径以受体动物的耐受性而有所不同。一般来说，当受体动物为小鼠时，常用Ab1最为50-200μg；若受体动物为家兔时，使用的Ab1量可达100-200μg。

（二）免疫动物的选择

抗独特型抗体可在自身体内、同类系、同种异体以及异种动物中诱导产生，因此在制备抗独特型抗体时可根据不同情况选用同类系、同种异体或异种动物（表9-1）。从制备技术上讲，可以制备单克隆抗Id和多克隆（免疫血清）抗Id。

表9-1 不同宿主免疫系统识别的抗体决定簇及抗独特型抗体的制备

1.同类系动物　用某一种抗原免疫某一品系的动物，分离纯化的Ab1再免疫相同品系的另外一只动物，可获得抗独特型体。例如Uytdegaag等将Ⅱ型脊髓灰质炎病毒免疫BALB/c小鼠，经杂交瘤技术制备了单克隆抗体（Ab1）,再用Ab1免疫BALB/c小鼠，制备了单克隆Ab2。

2.同种异型动物　Seto等从一只品系为a3b4家兔血清中纯化出IgG作为Ab1，然后免疫B/J品系家兔，得到了含有Ab2的免疫血清。用此方法制备的抗血清中，除了含有抗Id外，还含有抗同种异型决定簇的抗体。

3.异种动物　例如用人IgM作为Ab1免疫小鼠制备单克隆Ab2。由异种动物免疫制备的Ab2血清中，除抗Id外还含有抗同种型的抗体。

（三）抗独特型抗体的检测

抗Id抗体的鉴定至关重要。通常采用免疫学检测方法如ELISA、RIA、免疫荧光和中和试验等，可根据具体条件和需要加以选用。抗Id的鉴定必须设置充分的对照，确保检测结果的可靠性。例如，在鉴定小鼠源性抗原特异性人IgM抗独特型抗体时，用正常人IgM作为对照。将Ab1（抗原特异性人IgM）包被微孔板，然后加检测样品（小鼠源性抗Id），再加抗鼠的标记抗体，为了克服非特异性鼠抗人IgM同种型Ig造成的假阳性，同时用非特异性人IgM包被微板作为对照（图9-9）。当试验孔为阳性、对照孔为阴性时可基本确定为抗Id抗体。

图9-9 用ELISA间接法检测鼠源性单克隆抗Id示意图