美蓝染色检查胃粘膜幽门螺杆菌

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自从1983年Marshall报告幽门螺杆菌(Hylicobacter Pylori,Hp)以来,各国学者对其研究极为火热,它明确Hp与慢性胃炎消化性溃疡的发生,发展及复发相关。近年甚至认为Hp感染与胃癌相关。因而寻找一个简便而有效的Hp检查方法日益受到重视。我们在实践中摸索出的美蓝染色效果较好,并与尿素酶试验,细菌培养,Warthin-Starry银染色法及HE染色法进行了比较,现报告如下。

1 材料和方法

1.1 材料

无选择地对因有消化不良等上消化道症状来院作纤维胃镜检查者作快速Hp尿素素酶试验(用福建三强公司Hp药盒)。分别取尿素酶试验阳性者100例及阴性者50例作胃窦粘膜活组织菌培养及组织切片HE染色,Warthin-Starry银染色及美蓝染色检查Hp。

1.2 细菌培养

取胃粘膜活组织研碎,于1h内接种在加有两性霉素,万古霉素,TMP的血琼脂培养基上,置37℃和微需氧条件下培养4—7d,3d后即开始观察细菌生长情况;根据菌落特征,革蓝染色,尿素酶试验等实验加以鉴定,若7d后培养仍无细菌生长,则为阴性。

1.3 HE及Warthin-Starry银染色

石蜡切片脱蜡入水后常规HE染色Warthin-Starry银染色参照Warthin法进行。

1.4 美蓝染色

石蜡切片常规脱蜡入水后用0.03%美蓝溶液染0.5min~2min(视染液新旧而定),然后自来水清洗,再常规脱水,透明树胶封固,最后阅片。

2 结果

经尿素酶试验,Warthin-Starry染色,美蓝染色,HE染色及细菌培养等5种方法检查Hp结果见表1。

表1 组织切片染色法检查Hp结查

n尿素酶试验W-S银染色美蓝染色HE染色细菌培养
72
50
16
4
2
6

美蓝染色镜下观察Hp呈蓝色,胃粘膜上皮,胞浆及分泌物呈淡蓝色,固有膜,结缔组织呈深蓝色。Hp呈弯曲状,S状、短弧状及杆状,位于胃小凹或胃小凹分泌物中,亦可见于上皮细胞浆中。HE染色细菌着色浅淡,镜检时需非常仔细找才能发现。Warthin-Starry银染色细菌被染成浅黑色,组织背景呈黄棕色,易于辨认。

3 讨论

在作胃镜检查的同时取粘膜活组织作Hp检查是目前常用的检查Hp的途径。其中尿素酶试验方法简便但不能直接观察细菌,可出现假阳性及假阴性,常被用来作初步筛选之用,或被没有病理检查条件的基层单位所采用。细菌培养结果可靠,但费时太久,亦有假阳性存在,除非对已知有Hp感染而常规治疗失败者,一般临床未作常规检查。胃粘膜活组织切片染色镜检,以其直观准确,不需在病理活检以外另取活组织而受到重视。但常规病理切片的HE染色时Hp着色浅淡,不仅观察困难而且常容易漏诊。经典的Warthin-Starry银染色法,细菌与组织对比度强,观察容易准确率高,但染色过程繁锁,费时,显色时间也较难掌握,也很难作为临床常规使用。

我们在实路中摸索的美蓝染色,染色操作简便,快速,细菌与组织背景对比明显,用高倍光学显微镜即可清晰地辨认出Hp来,结果可靠,准确率高,值得推广应用。

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